ERCC1反义RNA降低肺癌细胞对苯并(a)芘所致DNA损伤的修复能力.PDF

生望擅醯医堂盘盍垫!生!且墨22盎箍!期坠地』堡竺些鲤：!鲤2垒盟。型!Z，丛：! 论著． ERCCl反义RNA降低肺癌细胞对苯并 (a)芘所致DNA损伤的修复能力 昊晓明用宜开徐颇清郝巧玲任恕 【摘要】 目的探讨核苷酸切除修复基因ERccl在肺癌细胞修复苯并(a)芘所致DNA损伤中 的作用。方法构建表达ERccl反义RNA的重组质粒，Lipofectin转染肺癌A549细胞，潮霉素筛选 出稳定转染的细胞克隆；噻唑蓝法检测24h细胞生存力；N叫hemBlot分析细胞ERccl基因mRNA 表达水平；单细胞凝胶电泳技术检测DNA损伤程度．每组计算50个细胞损伤情况。结果筛选出表 达ERccl反义RNA的7个阳性克隆，其生长特性与亲本细胞差别无显著性；内源性mRNA表达水平 h 不同程度降低，为亲本细胞的12％～86％；DNA损伤修复速度减慢，10岬彤L苯并(a)芘作用24 后再辫育24h，修复程度为亲本细胞的29％～71％；相关分析表明DNA损伤修复程度与 ERcclmRNA水平显著相关。结论ERccl反义RNA降低肺癌细胞对苯并(a)芘所致DNA损伤的 修复能力。 【关键词】 DNA修复；蛋白质类；苯并芘；RNA，反义；肺肿瘤；肿瘤细胞，培养的 AntIs蛆鸵ERCClRNAd钾他As蜉the DNA c印sinduced npⅡirc印矗bm圩ofdamagedjⅡ111畔c哪r byb彻[8]py咖阮w五洳一耐呵，删un-M，互U瓤卅口咄，肌OQ协一z垤，碰^，鼽H．胁‘拈眦。， 曲西硼删巩脚朋jd越舯，厅喝驴倒8删凸姆矿凰础增孤觇忖毋矿＆西瓣d材胁船研，阢加m 430030．ch沁 of T0 tI．ee饪∞t ERcclontlle 【Abs岫ct】objec6veinv鹪tiga‘e gene repair。印abil畸0fda砌弹d A549 DNAin caIlcer ceusinduced M棚Iods 111ng bybenzo[a]py砖ne Recombin锄‘plaBmid枉pre8si“g ERccl蚰凼enseRNAw酗c0珊hcted衄d呦如刚inf0A549cells scable一 byⅡpdf妇ma妒nc．而e ceⅡc01011ieswere纠ected w聃d眦盱fIlinedtlle 扛卸skted hy viabⅡity by MTT舶gay．1k hyg咖ycirI．cell level0fERcclmRNAw鹊mea8uredNonhem cell w船 h Blot蚰alvsis．sindegelelectrophoresi8肚8ay to ceuIIl盯DNA for蚰ch were∞un刚R器Ill虹鼬en de把肿i耽Ⅱle 印plied damage舯d矗姆ceⅡsgmup ERCCl皿6自e他eRNA dj廿÷rence p蒯Ⅱ阳colonies既pre嘶ng w雠8creened．111e陀硼B∞刚tb删e hm忡entIle聃tiser培e．Ⅱ肌sfected cells．The mRNA1evelin‰d砘ted ceU8明也thoparental endogenmIs 0f in