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细胞培养技术（实验篇） 安徽医科大学微生物学教研室 实验一 实验准备工作 材料（1） 实验内容 （一）配清洁液 （二）其他培养用液的配制及分工（分为三大组） 无菌分装5.6％NaHCO3（调PH值使用,技术室提供） 无菌分装1％胰蛋白酶（技术室提供） Hanks‘液（母液由技术室提供）： 配制双抗（无菌操作）： 特别说明 若未特别说明，上述试剂均放置2～8℃冰箱保存备用。 每次实验除菌过滤的顺序：五个班的RPMI 1640先滤，然后再滤Hank＇s液。 每组完成后统一收好，下次再分配到各小组。 谢 谢！ * * 2007年12月3日 合肥 －配液 6 6 火柴、标签纸、记号笔（套） 7 7 中号镊子（把） 2 2　 玻璃棒（个） 1 1 500ml盐水瓶（个） 各1 各1　 250ml、1000ml量筒（个） 3 3 大酒精瓶（个） 2 2 普通天平及匙勺（只） 每实验室准备量 预试验需要量 所需物品名称 染液1瓶 染液1瓶 结晶紫、甲醛、无水酒精 各1瓶 各1瓶 试剂（NaHCO3、KCL、NaCl、 Na2HPO4.12H2O、KH2PO4) 15瓶 1瓶 链霉素（1g) 30瓶 2瓶 青霉素(80万单位） 5000 5000 双蒸水（5000ml） 4000 4000 浓硫酸（ml） 2400 2400 重铬酸钾（g） 120 120 青霉素瓶塞（个） 120 120 青霉素小瓶（个） 1 1 1ml吸管（支） 5 5 5ml吸管（支） 3 3 10ml吸管（支） 70 70 无菌大翻（个） 70 70 无菌100ml/250ml盐水瓶（个） 材料（2） 配制注意事项：重铬酸钾溶于水中有时不能完全溶解，预先用2000ml热水助其溶解，再加入足量自来水，最后缓慢加浓硫酸。 切记：浓硫酸要缓慢加入，且边加边搅拌！ 配方：重铬酸钾 2400g 浓硫酸 4000ml 自来水 20000ml RPMI 1640培养液 试验器材： RPMI 1640 2袋 NaHCO3 4g 双蒸水 2000ml 搅拌溶解 过滤除菌 分装 100ml/瓶，共20瓶，塞好大翻，并注明名称配制日期和组别 （每实验室20瓶，每小组1瓶） 1台 天平 大翻、记号笔、标签纸 1台 过 滤器 1只 1000ml量筒 20个 无菌100ml盐水瓶 1个 2000ml大酒精瓶 试验试剂： 2袋 RPMI 1640 双蒸水 1瓶 NaHCO3 按照3ml/瓶分装，每室16瓶，每小组1瓶。（由学生完成分装） 试验器材： 1支 无菌5ml吸管 20只 无菌青霉素瓶 5.6％NaHCO3 配制（由教师完成）：3ml/瓶×16瓶×14班＝672ml 过滤除菌 按照1ml/瓶分装，每室16瓶，每小组1瓶。（由学生完成分装） 试验器材： 1支 无菌1ml吸管 20个 无菌青霉素瓶 1％胰蛋白酶 配制（由教师完成）：1ml/瓶×16瓶×14班＝224ml 过滤除菌 每室4瓶。每小组1瓶。 4个 无菌500ml盐水瓶 1个 大酒精瓶 1只 1000ml量筒 2支 无菌10ml吸管 配方： A液 100ml B液 100ml 双蒸水 1800ml 混匀 过滤除菌 分装 500ml/瓶，共4瓶，塞好 大翻，并注明名称配制 日期 试验器材： A、B母液 配制（由教师完成）：100ml/瓶×1瓶×14班＝1400ml 按5ml/瓶分装，瓶口贴好胶布作好标记，胶布上注明配制日期和组别。 20个 无菌青霉素瓶 2支 无菌5ml吸管 配方： 青霉素（80万U） 2瓶 链霉素（1g) 1瓶 Hank s‘液 100ml 混匀 每室20瓶。每小组1瓶。 试验器材： 30只 无菌青霉素瓶 1支 无菌5ml吸管 无菌分装牛血清： 无菌血清150ml 56℃的水浴锅中,灭活30min 按每瓶5ml分装，并在瓶口处贴好胶布作好标记，写好日期和组别。 每实验室30瓶。每小组2瓶。 试验器材： 血清购买（由教师完成）：150ml/瓶×1瓶×14班＝2100ml 过滤除菌 1只 100ml量筒 15个 无菌100ml盐水瓶 1个 标好1000ml刻度的酒精瓶 1×PBS配制： NaCl 8.0 g KCl 0.2g Na2HPO4·12H2O 2.9g KH2PO4 0.2g 去