细胞生物实验：小鼠染色体.ppt

小鼠骨髓染色体标本制备 实验目的 了解哺乳动物染色体标本的制作方法 了解小鼠骨髓细胞染色体形态与数目。 实验原理 由于小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞，具有高度的分裂能力，本实验采用这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。 实验器材 1．材料：小白鼠2．器具：注射器（1ml,5ml）、5号针头、解剖盘、解剖剪、镊子、玻璃吸管、10ml刻度的离心管、离心机、载玻片、盖玻片、显微镜、滤纸、擦镜纸、棉花、量筒、天平、恒温水浴锅 3．药品：0.01%秋水仙素、0.075MKCl、固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、Giemsa染液、0.01M磷酸缓冲液（PH6.8），0.85%生理盐水。  实验过程 实验观察 观察细胞的标准为：1．细胞完整，轮廓清晰，染色体分布在同一水平面上。2．染色体形态和分布良好。3．最好无重叠，即使有个别重叠，也要能明确辩认，以免差错。4．所观察的细胞处于同一有丝分裂阶段，即染色体螺旋化程度或染色体长短大致一样。在所观察的细胞周围，没有离散的单个或多个染色体存在，以免影响计数。  作业与思考题 1.绘制一个细胞分裂相。 2.KCL的作用。 3.实验结果不理想的原因。 * 1．预处理：实验前2.5-3小时，按每克体重注射0.02ml，给小白鼠腹腔注射秋水仙素。 2.断髓法杀死小鼠 3.髋关节处断下肢，剥去皮肉，用纱布擦去残肉，膝关节断下股骨。 4.用解剖针从两端刺透骨髓腔，将股骨一端固定在装有6.5号针头的1ml注射器上。 5.在装有3ml生理盐水的离心管中用注射器吸取盐水，反复冲洗骨髓，直至股骨变白。 6.弃掉股骨，换上4.5号针头，用注射器吸取生理盐水细胞悬液，以使冲出的骨髓细胞彼此分散开。 7.将悬液以1000r／min离心10分钟。 8.弃上清液，加入9ml37℃预热的0.075MKCL，于恒温水浴箱中低渗处理30分钟。 9.加入1ml新配制的固定剂，用吸管轻轻混匀。 10.以800r／min速度离心10分钟。 11.弃上清夜加10毫升新固定剂，用吸管将细胞团打散，混匀，室温下固定15分钟。 12.离心1000转／分，10分钟。 13.弃上清液，重新加入10毫升固定剂，用吸管吹打细胞，制成骨髓细胞悬液，室温固定30分钟。 14.1000转离心10分钟。 15.弃上清液，加入3-4滴固定剂，制成细胞悬液。 16.滴1-2滴悬液于冰水浸过的 载波片上（距离10-40cm)，对准液滴吹气，酒精灯上过2-3次，晾干。 17.吉姆萨染色8-10分钟。 18.流水冲去染液，晾干，观察（油镜）。 *