计数红细胞,白细胞.ppt

红细胞及白细胞计数 实验目的 掌握显微镜下红细胞和白细胞计数方法 实验原理 用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，冲入计数池后，在显微镜下计数一定体积内的红细胞数量，经换算求出每升血液中的红细胞数。 用白细胞稀释液将血液稀释一定倍数，同时破坏溶解红细胞。将稀释的血液冲入计数池后，在显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算求出每升血液中的白细胞数。 改良牛鲍氏计数板 支柱 计数池 支柱 血细胞计数板正面观 盖玻片 支柱 计数池 支柱 血细胞计数板侧面观 1mm 3mm 白细胞计数区域 白细胞计数区域 白细胞计数区域 白细胞计数区域 红细胞和血小板计数区域 大方格镜下示意图 中方格镜下示意图 器材： 显微镜、改良计数板、试管、微量吸管、移液管、洗耳球、试管架 试剂：生理盐水、红细胞、白细胞稀释液 标本：EDTA抗凝血 实验器材 实验操作(一)：红细胞计数 1. 加稀释液: 取小试管1支，加红细胞稀释液1.99ml。 2. 加血: 用清洁干燥微量吸管吸取抗凝血10μl，擦去管外余血，轻轻加至红细胞稀释液底部，再轻吸上清液清洗吸管2～3次，立即混匀。 3. 充池: 混匀后用微量吸管将红细胞悬液冲入计数池，室温下平放3～5分钟，待细胞下沉后于显微镜下计数。 4. 计数: 用高倍镜依次计数中央大方格内4角和正中共5个中方格内的红细胞数。 5. 计算:红细胞/L=N×25/5×10×106×200=N×1010 =N/100×1012 N：表示5个中方格内数得的红细胞数。 ×25/5：将5个中方格红细胞数换算成1个大方格红细胞数。 ×10：将1个大方格红细胞数换算成1μl血液内红细胞数。 106： 1L=106μl 200：为血液的稀释倍数 1mm 3mm 白细胞计数区域 白细胞计数区域 白细胞计数区域 白细胞计数区域 红细胞和血小板计数区域 实验操作(二)：白细胞计数 1.加白细胞稀释液: 用吸管吸取白细胞稀释液0.38ml于小试管中。 2.加血: 用清洁干燥微量吸管吸取抗凝血20μl，擦去管外余血，轻轻加至白细胞稀释液底部，再轻吸上清液清洗吸管2～3次，混匀。 3.充池: 混匀后用微量吸管将完全变为棕褐色的细胞悬液冲入计数池，室温下平放3～5分钟，待细胞下沉后于显微镜下计数。 4.计数: 用低倍镜依次计数4个大方格内的白细胞数。 5.计算: 白细胞/L=N/4×10×106×20=N/20×109/L N：表示4个大方格内数得的白细胞总数。 ×10：将1个大方格白细胞数换算成1μl血液内白细胞数 106： 1L=106μl 20：为血液的稀释倍数。 镜下计数 按次序，“矩形” “数上不数下，数左不数右”原则 注意事项: 稀释液和取血量必须准确。 冲池前应先充分摇匀血样，冲池时不可产生气泡，否则应重新冲池。 压线细胞应按“数上不数下，数左不数右”的原则进行计数，以免遗漏。 红细胞在计数池中分布应均匀，每个中方格之间相差超过20个以上时要重新冲池计数。正常数值范围内，两次红细胞计数相差不得超过5%。 稀释液要过滤，小试管、计数板均须清洁，以免杂质微粒等被误认为细胞。