五引物单管聚合酶链反应(PCR)扩增法快速测定人CYP2D610等位基因的类型.pdf

第 卷 分析化学 研究报告 第 期 33 FENX UAXUE 2 年 月 2005 2 ChineseJournal of Anal tical Chemistr 155 160 y y 五引物单管聚合酶链反应! 扩增法快速测定 PCR 人 。 等位基因的类型 CYP2D6 lo 卜 莹 张晓丹 马 涛 周国华。 华东医学生物技术研究所 南京 210002 摘 要 以人 。 等位基因位点为研究对象 建立了一种由 条引物同时 扩增在单管中进行 CYP2D6 10 5 PCR 等位基因快速检测的新方法 该方法在等位基因特异性扩增法的基础上 在内引物 端引入了一个人工错 3* 配碱基并在 5*端附加一段 尾巴 作为引物的锚定部分 使扩增反应的特异性得到了提高 本实验所建立的 方法可在单管中同时完成 种可能等位基因类型的快速检测 实测了 份样品的 。 等位基 SNP 3 47 CYP2D6 10 因的类型 并随机对其中 份样品的测定结果用 法进行了验证 结果完全一致 结果表明本法简便 20 RFLP 快速 结果准确 关键词 单核苷酸多型性 聚合酶链反应 等位基因特异性扩增 人工错配碱基 l 引 言 随着人类基因组计划的完成 研究方向已从基因组结构的分析转向功能分析 寻找与疾病发生 发 展相关的基因多态性标志位点 力争在疾病发生之前延迟或阻止疾病的发生 研究不同遗传背景的人与 药物毒副作用的关系 力争实现真正的个体化给药 提高药物疗效和降低药物不良反应 因此 在后基 因组计划中单核苷酸多态性 SNP 即基因多态性的分析及其检测仪器的开发是目前各国政府重点投 资和关注的项目之一 SNP 的数量极其庞大 发展一种高通量 快速和低价格的检测方法十分必要 细胞色素 酶 是人体内参与内源性物质和外源性物质代谢的重要代 P450 c tochrome P450 CYPy I 。 1 谢酶 本实验针对在东方人群中高发的CYP2D6 10 等位基因