使用γ磷酸锆为载体固定化血红蛋白的表征.pdf

广西师范大学学报(自然科学版) 2003年10月 GUANGXINORMAl。UNIVERSITY JOURNAl．OF 使用7一磷酸锆为载体固定化血红蛋白的表征 耿利娜，李娜。，李克安 北京大学化学与分子工程学院化学生物学系，生物有机分子工程教育部重点实验室，北京100871 研究蛋白质在界面上行为具有很大的理论意义和实际应用价值，但由于生物分子的复杂性，尚存在很 多未知领域“1．因而，以y一磷酸错为载体，血红蛋白的固定化研究不仅可以有效地制备层状化合物磷酸锆 生物纳米复合材料，而且为研究蛋白质在界面上的吸附行为提供有价值的信息．我们以y一磷酸错为载体， 将血红蛋白成功地嵌入到载体层间，制备了固定化血红蛋白．通常固定于载体上的蛋白质分子，其天然结 构会变化，甚至会失活．鉴于红外光谱和圆二色性光谱能够灵敏地反映蛋白质分子二级结构特征以及特征 的氢键结构‘“，本工作借助于红外光谱和圆二色性光谱来检测蛋白质分子的结构变化性质x射线衍射分 析手段分析纳米复合材料的晶体结构变化，并建立血红蛋白在各种载体上的吸附等温线等，以求表征固定 化的血红蛋白分子． 1实验部分 1．1固定化血红蛋白的制备 ①y磷酸锆的合成；②y一磷酸锆的预处理；③血红蛋白的固定． 1．2固定化血红蛋白的表征 22 分别使用VECTORFT—IR光谱仪(Varian)，圆二色性光谱(ISA Dmax2000 外一可见分光光度计(HITACHI)分析固定化血红蛋白．使用RigakuX一射线衍射仪来摄取x一 射线衍射图谱．通过批平衡的方法建立蛋白质分子在载体上的吸附等温线．以固定后平衡上清液中血红蛋 白的平衡浓度对蛋白质分子的装载量作图，得吸附等温线． 25000 20000 15000 ㈣ “X) 众5鞑 o 言g军E3．∞等】0 ㈣ ＼ ，一 ．】0000 ．1j“砌 X，n¨1 X／nm X／mn immob 1 ThecirculardichroismofdifferentconcentrationofHb Fig spectra uItrasonification；(B)BA；”ZrP；(C)TBA—y—ZrPrespectively． 230 广西师范大学学报(自然科学版) 第21卷 2实验结论 前的研究结果，可以认为血红蛋白分子在亲水和憎水环境中固定时结构发生不同的变化．血红蛋白如果插 子交换反应依靠静电作用固定在被正四丁基氢氧化胺剥层的载体7ZrP表面，引起蛋白质分子的二级和 三级结构的结构变形． 文献[3，4]报道，此类已被剥离成片状颗粒的层状无机化合物，在某些情况下会重新堆积成层状结构 (relamination)，从而将客体包含于层间．尝试在酶与载体达到平衡的体系中加入1 系pH=4的条件下制备的复合材料，材料的催化活性并没有改善，使用x射线衍射从结构上进行了解析． ∞ 拈 扑 ” o —6