反相高效液相色谱保留机理.pdf

综 述 反相高效液相色谱保留机理 —流动相的二次化学平衡作用 殷 芬 上（海医科大学卫生分析化学教研室） 使用化学键合有机固定相的反相高效液相色谱 学平衡，能使大多数极性和离子性化合物在反相色 RP—HPLC）已成为液相色谱中最重要的方法， 谱中获得成功的分离[5-9]。调节流动相，以保持或 在所有要进行分离分析的化合物中，有三分之二可 改变溶质的浓度或存在的形式，因而控制溶质在流 用RP—HPLC来完成[1-4]。 动相和固定相之间的分配。目前大多数研究工作都 反相液相色谱最初是用来分离非极性和非离子 是涉及到离子平衡 如（溶质的离子化控制和形成离 型化合物的。随着研究的不断深入，实践证明，将 子对）。此外，除对保留和选择性进行控制外，还 流动相的组分进行调节，往水溶性流动相中加入适 可靠抑制干扰竞争平衡或副反应来改善峰形，图1 当的缓冲液或有机改性剂，即控制流动相的二次化 表明了中性和离子化合物在反相柱上的保留范围。 性和碱性药物进行分析。其实验结果证实，流动相 一、缓冲液的使用及离子抑制 的pH值以及化合物本身的pKa值对保留性质有很 大量实验结果证实，对弱酸、弱碱这些在水溶 大影响，并认为化合物在ODS反相柱系统中的分 性溶液中易发生离子化的样品进行分离时，最简便 配主要取决于三个物理化学性质： 的方法就是用缓冲液来调节流动相的pH值[10,11], 1．化合物以非离子 化（）形式存在的比例 亦即对离子化过程进行抑制，所以此方法被称为 即（流动相pH值及化合物pKa的函数）。 “离子抑制”(lonSuppress)，且离子抑制最有效 2．化合物的非离子 化（）形式在固定相和流 的范围是在pH3—8[5]。 动相中的相对脂溶性 即（化合物在水和有机溶剂间 Twitchett和Moffat[12]在BondapakC1柱 的分配系数）。 上用甲醇和各种不同PH值的磷酸缓冲液混合组成 3.流动相中甲醇的比例。 流动相。选择了三十种有代表性的强酸、弱酸、中 正如所料，化合物的非离子化形式易分配进入 固定相。因此，当化合物的pKa和分配系数 已知 时，可对其色谱性质进行推测。 二、离子对色谱 此外，缓冲盐的种类对化合物的保 留也有影 离子对技术在很多情况下可代替离子交换用于 响。有实验发现[13]，在流动相中用派嗪或磷酸四 分离离子化合物。此方法现已能够对大量化合物 亚甲基二胺代替磷酸钠作缓冲液时。同样是将流动 包（括生物胺、药物及其代谢物、染料、羧酸等） 相pH调至6，而被分离物的保留性质有明显改变， 进行有效分离[20-24]。现代离子对液体色谱可归为 峰形改善。Popl等[14]也进行了这方面的研究，用 几类：1．正相离子对分配色谱，将会有离子对试剂 甲醇:水7（0:30）的流动相，缓冲液浓度和PH值保 的水溶液涂布在硅胶上，用有机溶剂流动相洗脱化 持不变，用醋酸铵代替磷酸二氢钠时，生物碱的保 合物；2．反相离子对分配色谱，固定相为非极性表 留因子减小。这说明，除有维持溶液pH值的作用 面 如（C8或C18），分离酸时在水溶性流动相中加 外，缓冲液还有多种作用，这些还有待于进一步探 入有机碱 如（磷酸四丁铵），分离碱时可加入有机 讨研究。