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微孔板光学检测技术 在食品药品安全检测中的应用 目录 • 微孔板光学检测方法介绍 • 大分子药物中宿主DNA残留光学检测方法 • 食品安全光学检测方法 • ELISA工作流程及解决方案 2 微孔板光学检测方法介绍 3 微孔板(Microtiter Plate / Microplate) • 微孔板(Microtiter plate ／microplate)是一块上有多个孔 的平板，每个孔可作为一个微型试管，它已成为分析研 究和临床诊断实验室的标准化工具。 • 常见的有6, 12, 24, 48, 96, 384甚至1536孔板 • 增加了实验通量、节约成本、提高可重复性 历史 • 是早的微孔板造于1951年，为匈牙利人Dr. G. Takatsky 。 • 普通应用始于上世纪50年代后期，因美国人John Liner 将其模具化. • 到了1990年，已经有多于15家公司生产具有各种性能的 微孔板 • 据估计，仅2000年一年，全球就使用了1.25亿块微孔板 • “Microtiter” 是一个注册商标，(U.S. Trademark 72,128,338.) Thermo Electron 是其所有人 • 1996年, 生物分子科学学会，Society for Biomolecular Sciences (SBS)，开始着手制订微孔板的标准定义。 • 2003年美国国家标准研究所代American National Standards Institute (ANSI)表SBS 提出并发表了一系列 标准. Source:/wiki/File:Microplates.jpg 4 微孔板光学检测方法 • 光度测定 Photometry (Absorbance) • 荧光 Fluorescence • 荧光共振能量转移 Fluorescence resonance energy transfer (FRET) • 时间分辨荧光 Time-Resolved Fluorescence (TRF) • 时间分辨荧光共振能量转移 (TR-FRET) • 化学发光 Luminescence • 生物发光共振能量转移 Bioluminescent resonance energy transfer (BRET) 5 光度测定 Photometry 光度测定（比色法） • 光度测定基于光吸收 • 吸收导致经过待测液体后光强减弱 • 光强的减弱程度= 待测样品的吸光值 • 可检测的光波长范围可从紫外光到可见光 • 用染料/有色物质通常用来作为标记物，其颜色对应于特定波长的光 • 光吸收有时也称为“光密度”Optical Density (OD) • 光密度的大小与有色物质的浓度成正比 I0 A Log 10 I 7 荧光强度测定Fluorometry 荧光色素 （Fluorochromes） • 能接收激发光发出荧光的分子 • 荧光化合物有其特征性激发和发 射光谱 • 发射光的波长大于激发光的波长 （能量低） • 发射光与激发光峰值的差值称为 斯托克斯位移（Stokes Shift ） 9 荧光共振能量转移(FRET) 机制： • 能量从被激发的供体分子转移到能量较低的受 体分子 • 供体分子返回到常态（非激发态） • 受体分子发出光子 条件： • 供体的发射光谱和受体的激发光谱有重叠 • 供体的发射光谱和受体的发射光谱分开 • 供体分子与受体分子必须充分接近（10nm) 10 时间分辨荧光(