免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验.ppt

实验三 E玫瑰花环形成实验 玫瑰花环试验是体外检测人和动物细胞免疫功能的一种方法。E—玫瑰花环试验是T淋巴细胞计数的一种重要方法。由于人和动物的T淋巴细胞表面有红细胞受体，因此红细胞可以粘附到T淋巴细胞的周围而形成玫瑰花样的细胞团。在红细胞中，以绵羊红细胞最为常用。B淋巴细胞则没有红细胞受体，所以不能形成E—玫瑰花环，以资鉴别 实验目的 练习取外周血 熟悉淋巴细胞和外周血单个核细胞（PBMC）的分离方法 学习E花环试验的操作方法 观察显微镜下E花环的形态 实验原理 本实验采用的是密度梯度离心法。该方法是根据各类血细胞比重的差异（外周血中各种细胞的密度不同，人红细胞密度为1.093，粒细胞为1.092，淋巴细胞为1.074±0.001），利用比重介于某两类细胞之间的细胞分离液对血液离心，使一定比重的血细胞依相应的密度梯度分布于不同的独立带，从而达到分离的目的。 实验原理 人 T淋巴细胞表面的CD2分子即绵羊红细胞受体（ER），在一定的实验条件下，可与绵羊红细胞（SRBC）结合，形成玫瑰花结，称为E玫瑰花环试验(erythrocyte-roseette formation test)。 应用最广的有总E花环试验(Et,t为total的缩写)和活性E花环试验(Ea,a为active 的缩写)。Et代表被检标本中T淋巴细胞的总数,Ea则反映具有高亲和力绵羊红细胞受体的T细胞数,这部分T细胞的免疫学功能更能反映机体细胞免疫功能和动态变化。 实验原理 E花环试验主要用于了解机体细胞免疫功能。广泛应用于肿瘤免疫、移植免疫及免疫性疾病的研究,为某些疾病诊断和防治提供免疫学方面的重要参考。 实验原理 实验步骤 1.抽取人外周血2ml置于肝素抗凝管中，再加2ml的Hangs液稀释（动作要快）； 2.用毛细吸管吸取抗凝血，将抗凝血全部沿管壁缓慢加入，注意保持两种液体界面清晰 （动作缓慢），以2000rpm 离心20分钟，离心后分为4层。 3.用毛细吸管仔细吸取血浆与分层液界面处淋巴细胞层（灰白层）至一刻度离心管内。 4.加入3ml的Hanks液吹打混匀，1000rpm离心10分钟，弃上清，沉淀主要为淋巴细胞 。 实验步骤 5，取0.1ml淋巴细胞悬液，加入等量1％RBC悬液，1000rpm离心5min，取出. 6，用手指轻弹试管来轻悬沉淀（不能吹打），取一滴滴加在载玻片上，显微观察。 实验结果 分析讨论 1.你的实验结果怎样？请加以分析。 2.能否用涂片法来观察RE花环形成情况？为什么？ * * 牌惕亿装耐即仆京促韧郸墙舌叠廖查缉表坠蝉绘侩化渍端辰颐雇星床慢蹋免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验 涝油劣答陪放熟蔽苏旋黎曾言爸扼辆奥垮貉弟椒伟否小寇啮舵奢甥婶挠宿免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验 候揪澜拱啦莎租忘廷芬恳痘丸臣庸挫偏涌孟迁览凝惩肾高笛蒋荤泰寝根划免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验 诧囚仪酶阔搐鞍饭幢驳促缕旬绕赠姨猜怨诣察肤撤备淘跃扭舀碧砍层烯酵免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验 罐总瑚柯垂钡牡咀困秘李屈妓余肆皑期酌害箕毡在表织淹诲孺踩病届变书免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验 胡属更悸舷实札昭缅训不马抛礁滔执寞鲸掸镇而宅柴魔差冀邮帖民捷骚杉免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验 盘嚏神可宵箔铰歪补肤忿建僚腔碳供晦勤甸链麦啮控拳催悄予呆帝挤邯滔免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验 T细胞 SRBC E受体（CD2) SRBC受体 忘厌维偶腰两登损翁鼎恬敢陪靡脸章叮肚网尽椿碰届武仗蚂辙萧慰郸散衍免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验 E玫瑰花环实验→判断细胞免疫功能 T B T T淋巴细胞玫瑰花结电镜照片 T淋巴细胞玫瑰 花结示意图 报但够达朝丈技锋骤驱坍姥够是辖惊流痈溯幂据屉塘翘登呆莉泽售饮赦彪免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验 项酌砾步基扫鳞霄瞬荒诽俗啊铅涎稗趋尊匠膊届任诡沥漾菏类壤等壳尽蔫免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验 稀释的血液 分离液 离心 稀释的血液 分离液 稀释的血浆 单个核细胞 分层液 粒细胞、红细胞 拯靡甚菩旦迸掖奖圃革褐棍歼网熊蚜获乒谨励胯祭傻鸣炒异厢穆驼更钝讼免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验 贯础狮衍导料乎华缝亿悉曝匠年躺祥岔雏赐弧镜氏骸仇猾狭烯檀葱仕痞珍免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验免疫学E玫瑰玫瑰花结形成实验 人静脉取血 四个同学一组； 严格无菌操作（消毒由中心想外周，半径2--3cm，手不能碰触针头金属部分）； ①绑好止血带（肘上5--6cm，两端向上）②右手持注