第十九章 致癌作用的研究.ppt

７、试验期限 动物正常寿命的大部分时间或终生 大鼠：两年以上（平均寿命2~2.5年） 小鼠：一年半以上（平均寿命1.5~2年）。 当给药组与阴性对照组之间肿瘤发生率已有明显差别时，可提早结束试验。 有观点认为：为减少中途非肿瘤死亡，应在9-12月后停止给药 支持：使得动物由中毒或亚中毒状态恢复，存活时间较长和存活动物较多； 反对：虽对完全致癌物无较大影响，对于促癌剂可能出现可逆反应，抑制肿瘤发生率下降 8、动物饲养 恒温、恒湿大、小鼠：23.3±1.1℃、40±5% 饲料中不能含有亚硝胺、黄曲霉素和杀虫剂等可能的致癌物质 自然存在于动物饲料中的各种酶的诱导剂和抑制剂可能影响动物肿瘤的发生或其他一些参数的变化 9、观察与检查 （1）一般观察： 每天观察动物1~2次，外表、活动、摄食状况等。定期称量体重。 全身浅表部位有无肿块，以及肿块出现的时间、部位、大小、数目、质地、发展速度及动物死亡时间等。 （1）一般观察： 疑为白血病时，作血液检查。 试验中途死亡或濒死的动物，应及时解剖检查，防止组织自溶。对全身各组织器官逐一取样，特别是有肿块或有病变的部位，留待病理组织学检查。 （2）解剖和病理组织学检察 试验结束时，处死动物。大体解剖，肉眼观察各组织器官，逐一取样留作标本，特别是已出现肿块或怀疑有病变的部位。 病理组织学检查（光镜及电镜）。 尸检中需要检查和固定的器官和组织 肾上腺 大脑 盲肠 结肠 软骨结节 十二指肠 食管 眼睛 胆囊 心脏 空肠 肾脏 喉咙 肝脏 支气管 乳腺 下颌淋巴结 肠系膜 鼻腔 卵巢 胰腺 甲状旁腺 垂体 前列腺 直肠 唾液腺 坐骨神经 精囊 皮肤 脊髓 脾脏 胸椎脊椎骨髓 股骨 睾丸 大腿肌肉 组织团块可疑肿瘤 甲状腺 胸腺 膀胱 子宫 11、统计分析 统计各种肿瘤的数量（包括良性和恶性肿瘤）及任何少见的肿瘤、患肿瘤的动物数、每只动物的肿瘤数及肿瘤潜伏期 ① 肿瘤发生率：一组动物中发生肿瘤的动物数与该组有效动物数（最早出现肿瘤时该组存活动物数）之比。 内脏肿瘤不易早期发现，通常将肿瘤引起该动物死亡的时间，定为发生时间。 ② 潜伏期： 从动物接触药物开始，到出现第一个肿瘤的天数。 ③肿瘤多发性：一个动物出现多个肿瘤或一个器官出现多个肿瘤。 12、结果判断： （1）给药组肿瘤发生率显著高于对照组自发肿瘤率。 （2）给药组肿瘤发生的潜伏期显著短于对照组。 （3）给药组肿瘤发生的部位多于对照组。 12、结果判断： （4）给药组肿瘤的类型与对照组不同（对照组应有历史对照资料）。 符合上述情况之一，并有统计学意义时可判为阳性，如有明显的剂量反应关系，结果更为可靠。 13、试验结果的意义 一种动物试验结果为阳性时，预示该受试药对人可能有致癌潜力。 两种动物试验结果皆为阴性时，可初步认为该受试药对动物和人都没有致癌性。 *彗星试验 单细胞凝胶电泳（single cell microgel electrophoresis, SCGE），以DNA损伤与修复为检测终点。 对多环芳烃、芳香胺、金属致癌化合物、氧化剂等常见致癌物类型阳性检测率很高。 优点：检测谱宽、检测终点明确、观察结果直观、方法简便、适合体内和体外实验，也是接触已知致癌物的生物与人群的检测和分子流行病学调查的重要工具。 *转基因动物模型 （1）转癌基因小鼠模型 与转录启动子连接的癌基因转入后可直接在某些特定的组织中高效表达，使得组织细胞处于启动状态，这类转基因动物是研究化学物致癌作用的敏感体系。 试验周期短，仅3个月左右。 可用于研究外源化合物与肿瘤相关基因的作用及外源化合物在致癌不同阶段中的作用机制。 （2）P53小鼠模型 异质结合体P53+/-小鼠仅具有单个功能复制P53基因，在所有人类癌症中多于50%通过突变或缺失而丢失。由于只有一个单个功能等位基因， P53小鼠正常发展，但对肿瘤诱发敏感性增加，这种情况类似于遗传性肿瘤抑制基因缺陷的个体。 当给予突变致癌剂时， P53+/-小鼠与正常小鼠相比通常在6个月内迅速发生肿瘤，而未处理的P53+/-小鼠在试验期间内通常不发生肿瘤。 3. 进展阶段 在促癌阶段中或之后，细胞在化学致癌物作用下出现复杂的基因改变(染色体的结构变异、大段丢失、易位或嵌入)，细胞形态和行为发生变化, 如生长加速、高度的侵犯性、转移能力、对激素的反应性改变以及生化、免疫性能改变等，从而获得了恶性肿瘤细胞的特性。 在进展阶段起作用的化学物质称为进展剂(progressor)，它们常常也是启动剂或完全致癌物。 综上所述，化学致癌过程是多阶段、多因素、多基因参与的长期累积