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3种精子优化处理方法处理精液效果评价摘要: 目的:为了解上游法#65380;Percoll梯度离心法#65380;Isolate密度梯度离心法等精子优化处理方 法处理精液的效果。方法:选取120例女性原因引起继发不孕的夫妇,将男方的精液 标 本按处理方法不同随机分4组,即为上游组#65380;Percoll组#65380;Isolate组和对照组,应用指标精 子密度#65380;a+b级活力#65380;正常形态率和绿色荧光精子百分率,对精液处理后的效果进行比较。 结果:上游组#65380;Percoll组和Isolate组,富集的精子a+b级活力#65380;正常形态率#65380;绿色荧光精 子明显高于对照组(P 0.05),但上游组的精子密度很明显低于对照组(P0.05),但精子 回收 Percoll密度梯度离心法和Isolate密度梯度离心法明显高于上游法(P0.05). However, the sper m de nsity of Swim up group was significantly lower than that of the control group( P0.05)?. Ho weve r, the sperm density of Percoll group and Isolate group was significantly higherthan that of Swim up group?(P0.01)?. The rate of green fluorescent spermof Isolate gro up was the highest among Swim up group, Percoll group and Isolate group. Conclusion: T heeffect of semen processed with Isolate density gradient centrifugation method w as better in three methods. Key words: sperm; optimization; evaluation 精子优化处理是辅助生殖技术治疗中的常规步骤,目的是富集足够数量具有高活力#65380;正常形 态和正常功能的精子。常用于精子优化处理方法有上游法#65380;Percoll梯度离心法#65380;Isolate密 度梯度离心法等,为了选择比较适合于辅助生殖技术治疗的精液处理方法,笔者对这3种优 化处理方法处理精液后的效果进行了评价,现将结果报告如下。 1 材料与方法 1.1 实验对象和标本采集 标本选自2008年6~12月份,120例女性原因引起继发不孕的夫 妇,男方年龄在24~40岁,禁欲3~5d,用手淫法取精,将精液收集入无菌无毒容器内,置 37℃(5%CO2)培养箱内液化。 1.2 实验仪器和试剂 无菌操作台(苏州佳宝净化公司),TDL-5Z-B型离心机(湖南星科公司),普 通 显微镜和荧光显微镜(日本OLYMPUS);洗精液(ART-1006),平衡液(ART-1020),Isolat e精 子分离液(40%,80%二氧化硅胶体液组成上#65380;下层,美国IrvineScientific公司),Percoll 精子分离液(40%,80%聚乙烯吡咯烷酮液组成上#65380;下层, 上海晶天生物科技有限公司),吖啶 橙(AO)荧光染液100ml(自配:0.06g/L吖啶橙,37mmol/L 枸橼酸,126mmol/L Na2HPO4 ;1mmol/L EDTA,0.15mol/L NaCl,pH6.0)。 1.3 实验分组 对120例标本随机分为4组,每组30例,对照组(不做特殊处理),上游组( 即上游法处理组),Percoll组(即Percoll密度梯度离心法处理组),Isolate组(即Isola te密度梯度离心法处理组)。 1.4 精子处理方法 ①上游法:取液化精液2ml与4ml洗精液(ART-1006)混匀,300g离心15min ,留管底精子团,再用2ml洗精液(ART-1006)混匀,300g离心10min,去除上清液后,留底 部沉 淀精子,加入1.0ml平衡液(ART-1020),倾斜45度角,置CO2培养箱孵育45min,待精子充 分上游后, 吸取上层含精子的悬液0.5ml于无菌试管中。②Isolate密度梯度离心法:取2.0ml 40% Is olate(上层)加入锥形离心管内,然后用无菌巴斯德吸管垂直沿管底缓慢加入2.0ml 80% Isol ate(下层),使两液层交界处可见清晰分界面,最上层加入待处理精液2.0ml,