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Ferene-s络合法检测血清铁方法学评价【摘要】目的：探讨对Ferene-s络合法检测血清铁进行方法学评价。方法：用Ferene-s络合Fe2+生成红蓝色复合物测其终点吸光度的变化，观察其显色稳定性、灵敏度、线性、精密度、准确度、溶血干扰。结果：显色物最大吸收波长566 nm，显色后5～60分钟内稳定，灵敏度1.875 μmol/L，线性范围0～120 μmol/L，批内CV值1.57%，批间2.40% ，回收率103.5%，标本中血红蛋白含量＞1.5 g/L对测定有影响。结论：该方法显色稳定、灵敏度高、线性好范围宽、精密度好、准确度高、血清用量少，具有操作简单、快速等特点，适用于临床检验室采用。 【关键词】血清铁；络合比色法 文章编号：1009-5519（2007）03-0347-02 中图分类号：R446 文献标识码：A 铁是人体内重要的常量元素之一，主要存在于红细胞的血红蛋白中,血清中也有一定含量，多与蛋白质结合形式存在。血清铁测定对诊断血液系统、肝肾疾病和蛋白质缺乏症具有重要的意义。目前测定血清铁的方法有原子吸收法[1]和比色分析法。比色分析法中因采用的还原剂或显色剂不同而有很多种方法。我们对Ferene-s络合Fe2+测定血清铁的方法进行了方法学实验，现将结果报道如下： 1材料和方法 1.1仪器：721分光光度计（四川仪表九厂）。 1.2试剂：德国Prodia公司生产的试剂盒[国药管械（进）2000第号）。（1）铁标准液：30 μmol/L；（2）还原试剂粉：Ascorbic Acid；（3）显色剂 ；（4）缓冲液；（5）工作液：一瓶50 ml缓冲试剂溶解一小瓢（试剂盒所规定的量）还原试剂粉再加1 ml的显色剂混匀。 1.3方法 1.3.1原理：铁在酸性环境中与运铁蛋白分离，然后加入Ascorbic Acid使Fe3+转化为Fe2+，再与显色剂生成Ferene-s络合Fe2+的红蓝色复合物，测其终点吸光度的变化。 1.3.2操作步骤：取试管编好号，将血标本尽快分离，取血清500 μl于测定管内；取500 μl标准液于标准管内（平行两管）；再分别加配好的工作液2 500 μl，充分混匀，在室温下静置5分钟后，在721分光光度计上比色（60分钟内完成），读取相应的吸光度。 1.3.3计算： 铁的含量=标准液的浓度×A样本/A标准液。 1.3.4比色波长选择： 以标准液30 μmol/L为样本, 按照操作步骤测定。蒸馏水调零，选择波长500～600 nm每隔10 nm读取一次吸光度值，其中550～580 nm之间每隔2 nm读取1次，记录OD值。 1.3.5显色稳定性观察：以标准液30 μmol/L为样本, 按照操作步骤测定，选择波长566 nm测定OD值。显色开始计时，以蒸馏水调零,每隔5分钟读取一次吸光度。 1.3.6线性观察：配制浓度为200 μmol/L的铁标准液,分别稀释成浓度为 20、40、60、80、120 μmol/L，按照本法操作规程测定，作出曲线，求出其a、b、r值。 1.3.7灵敏度测定：用30 μmol/L的标准液对倍稀释成，15、7.5、3.75、1.875、0.938 μmol/L按操作步骤测定，读取吸光度值，观察其灵敏度。 1.3.8精密度：（1）批内精密度测定：将一份混合血清按照操作步骤平行检测20次，计算其X、 SD 、CV。（2）批间精密度测定：将同一份混合血清分装到6支试管中，其中的5支放入冰箱保存，以后每天取1支恢复至室温按照操作步骤测定血清铁值， 每天平行3次， 计算6天的X、SD、CV。 1.3.9回收实验：取已测得血清铁含量为9.9 μmol/L的混合血清标本,分成3份，每份1.0 ml，其中一份为基础管并加入0.1 ml的生理盐水，另外两份分别加入10 μmol/L、20 μmol/L标准液0.1 ml，进行回收实验。回收率=（实测值-预测值）/加入值×100% 1.3.10干扰实验：在本方法测定条件下,将混合血清分装成4支试管中，其中一管为基础管，另外3管为样品管1、2、3中分别加入游离血红蛋白1.0、1.5、2.0 g/L溶液0.1 ml，进行测定观察吸光度值。 2结果 2.1比色波长选择：按本方法测得最大吸收峰的波长在 566 nm处。 2.2显色稳定性：60分钟内吸光度值波动在0.207～0.209，表明在室温下显色快且稳定。 2.3灵敏度：标准液浓度1.875 μmol/L的吸光度值为0.012，灵敏度高。 2.4线性观察： 按本法的条件测得浓度在120 μmol/L内线性良好，b=0.007，a=0.002，r=0