HPLC 法测定清热化毒丸中黄芩苷含量.docVIP

HPLC 法测定清热化毒丸中黄芩苷含量【摘要】为了控制该制剂的质量，本文采用HPLC 法。以黄芩苷为对照品，测定其制剂中黄芩苷含量。 目的建立清热化毒丸中黄芩苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法测定,Diamonsil C18色谱柱，检测波长为315 nm。其结果平均回收率为99.81%.,RSD =0.93%。结论本方法测定清热化毒丸中黄芩苷的含量,方法简便、准确,结果稳定,可用于控制该丸剂的质量。 【关键词】清热化毒丸;黄芩苷;高效液相色谱法 清热化毒丸是一种纯中药制剂，由连翘、青黛、黄连等十五味中药材加工而成。具有清火化毒、消肿止痛等功效。为了控制该制剂的质量本文采用HPLC法，以黄芩苷为对照品，测定其制剂中黄芩苷含量。 1仪器与材料 美国戴安P680型高效液相色谱仪、UV170检测器、ROMELEON（变色龙）色谱工作站，Diamonsil C18色谱柱，KQ―100 型超声处理器。供试品（批号：070201、070202、070203）由辽宁东方人药业有限公司提供，黄芩苷对照品（0110715-200212含量测定用中国药品生物制品检定所提供），甲醇为色谱纯，其它试剂为分析纯。 2实验方法与结果 2.1色谱条件与系统适用性实验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.4%磷酸（45：55）为流动相；检测波长为315nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3000。 2.2对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml中约含30μg的溶液，即得。 2.3供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品，剪碎，混匀，取约2g，精密称定，加70%乙醇40 ml,回流提取3 h，，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，即得。 2.4阴性溶液制备：按处方的比例和制法，制成缺黄芩的阴性对照样品，取2g按供试品溶液的制备方法，制成阴性溶液。 2.5干扰试验分别精密吸取供试品溶液、阴性溶液，对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，结果表明阴性溶液未呈现与对照品保留时间相同的色谱峰,对测定无干扰。 2.6样品含量测定 2.6.1线性关系考察 精密吸取每ml含黄芩苷对照品14.2ug/ml、28.4ug/ml、42.6ug/ml、56.8ug/ml 、56.8ug/ml、71.0ug/ml精密吸取以上样品各20μl，分别注入液相色谱仪，测定吸收峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程：y=100157.4X+1151340.8 ; r=0.9993,对照品浓度在0.284～1.42μg范围呈线性关系。 2.6.2 精密度和 稳定性试验取样品批号070201按2.3供试品溶液制备方法制备样品溶液，重复进样5次，进样量20μl，其峰面积相对标准偏差(RSD)为1.2%，表明精密度较好，取同一样品溶液在0、2、4、10、24h分别进样测定，测定结果5次测得值的RSD 为1.5%，可见黄芩苷在24小时内稳定。 2.6.3重现性试验 取样品批号070201，按“2.3”项方法操作，重复测定6次， RSD为1.6%。表明方法重现性良好。 2.6.4 加样回收率试验 取样品批号070201的供试品含量为6.0mg/丸研细，分取5份分别定量加入黄芩苷对照品适量，按“2.3”项方法操作得回收率试验依法测定平均回收率98.2%，RSD为1.0%. 2.6.5 供试品含量测定：取3批供试品按拟定含量测定方法测定黄芩苷的含量，结果每丸含黄芩以黄芩苷计含量分别为6.6mg/丸、6.0 mg/丸、6.4 mg/丸。 3讨论 通过方法学系统考察和样品含量测定，建立了本制剂中黄芩苷的HPLC含量测定方法，具有专属性强，重现性好，无明显干扰等优点，是控制本品内在质量的理想方法。 参考文献 [1]中华人民共和国药典委员会，中华人民共和国药典：一部[J] 北京；化学工业出版社，2005，248。 ［2］傅桂兰.HPLC法测定黄芩及复方制剂中黄芩苷的含量［J］.中国中药杂志，1994，19(12)：731. 1