HPLC探究藜芦-丹参配伍后藜芦定含量.docVIP

HPLC探究藜芦-丹参配伍后藜芦定含量（三峡大学 护理学院，湖北 宜昌 443000）?? 摘 要：目的：研究藜芦药材及丹参-藜芦配伍后藜芦主要化学成分的变化。方法：采用HPLC法测定藜芦定的含量，比较配伍前后对二者的影响；色谱条件：Diamonsil-C?18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水-0.1M醋酸铵溶液（59∶1∶40），柱温：25℃；检测波长：220nm；流速：1mL#8226;min-1。结果：在0.292～1.460μg#8226;mL-1范围内线性关系良好（r=0.9998，n=5），平均回收率为95.17%，RSD=1.44%（n=5）；丹参配伍后藜芦定的含量升高，显示其毒性增加。结论：该方法简便，标准客观，可供参考。? 关键词：配伍；十八反；化学成分；丹参；藜芦? 中图分类号：R284.2文献标识码：A文章编号：1673-2197（2009）01-0017-02? 丹参为唇形科植物丹参的干燥根及根茎，主要含有丹参酮ⅡA、隐丹参酮及丹酚酸B具有活血调经、祛瘀止痛、养心安神等功效，在抗心脑血管疾病、抗衰老、抗肿瘤等方面有重要应用。 ? 藜芦为百合科植物藜芦的干燥根，主要功效为催吐、祛痰、杀虫。主要含有生物碱类成分，其中以藜芦定含量较多，小剂量时具有一定的降压作用，而剂量较大时则成为一种脂溶性神经毒素，能引起神经肌肉兴奋，心律不齐等。? 目前研究“十八反”“十九畏”的综述性文章较多，但从化学成分的角度研究“十八反”“十九畏”药物配伍的较少，尤其在临床上丹参和藜芦属于相反配伍，而关于两者配伍的实验性研究尚未见报道。笔者在参考相关文献的基础上，采用HPLC法对丹参、藜芦各自单煎剂及二者的共煎剂中主要化学成分的变化情况进行了研究，现报道如下。? 1 仪器与试药? 1.1 仪器? Dionex-P680液相色谱仪（德国戴安公司，四元泵，UVD170U检测器，Chromeleon色谱工作站），AT-201电子分析天平（d=0.01mg，瑞士），SK5200H超声波清洗机（上海科导超声仪器有限公司），北京医用离心仪LD5-10，KMD型电热套（山东省鄄城永兴仪器厂）。? 1.2 试剂和试药? 藜芦定对照品（verartidine，含量≥95%，美国chromadex公司，批号：94838-2007584），丹参酮ⅡA对照品（供含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号：110766-200417），丹酚酸B对照品（供含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号：111562-200605），甲醇（美国Fisher公司，色谱纯），已腈（美国Fisher公司，色谱纯），醋酸铵（武汉市无机盐化工厂，分析纯），甲酸（上海振兴，分析纯），水为娃哈哈纯净水。其它试剂均为分析纯。藜芦（购于安徽省毫州沪谯饮片厂），经湖北中医学院生药学教研室陈科力教授鉴定为百合科植物藜芦的干燥根） 。丹参（购于湖北省中药饮片厂），经湖北中医学院生药学教研室陈科力教授鉴定为唇形科植物丹参的干燥根及根茎）。? 2 方法与结果? 2.1 色谱分析条件? 色谱柱：Diamonsil-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水-0.1M醋酸铵溶液（59：1：40），柱温：25℃；检测波长：220nm；流速：1mL#8226;min-1。在本色谱条件下，理论板数按藜芦定峰计算应不低于3000。藜芦定峰与杂质峰的分离度应符合要求。? 2.2 对照品溶液的制备? 精密称取藜芦定对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.146mg的溶液，即得。? 2.3 供试品溶液的制备? 藜芦单煎剂的制备：取藜芦约10g，参照藜芦丹参共煎剂的制备方法制备，即得藜芦单煎液供试品。藜芦丹参共煎剂的制备：取藜芦和丹参各约10g，置圆底烧瓶中，加入80mL水，加热回流3h，滤过，榨取药汁，合并。置电热套中浓缩至四分之一体积。加入甲醇20mL，超声处理（功率150W，频率20KHz）1h，取出，放冷，摇匀，离心30min，滤过，转移至50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）过滤，取续滤液，即得。? 2.4 标准曲线的制备? 精密吸取上述对照品溶液2、4、6、8、10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，以相应的峰面积积分值对进样体积进行线性回归，得到回归方程：y=1.2369x-0.2490，（r=0.9998，n=5），线性范围为0.292mg～1.460mg。? 2.5 精密度试验? 吸取上述对照品溶液5μL，按上述色谱条件，连续进样6次，结果峰面积积分值分别为5.7959、5.8669、5.6