HPLC-ELSD法测定芪苓升白颗粒中黄芪甲苷含量.docVIP

HPLC-ELSD法测定芪苓升白颗粒中黄芪甲苷含量[摘要] 目的：建立芪苓升白颗粒中黄芪甲苷的高效液相测定方法。方法：采用HPLC-ELSD法测定黄芪甲苷的含量。色谱柱为Agilent C18柱（150 mm×4.6 mm ，5 μm），以乙腈-水（35∶65）为流动相 ，柱温为室温，流速为1ml/min。SEDEX75蒸发光散色检测器，漂移管温度为50℃，载气压力4.0(Bar)。结果：黄芪甲苷在1.0～10 μg浓度的对数与峰面积对数有良好的线性关系（r=0.9995，n=5），平均回收率为97.5%( RSD=1.37%)。结论：该测定方法精密度高，重现性好，可用于芪苓升白颗粒的质量控制。 [关键词] 芪苓升白颗粒；黄芪甲苷；高效液相色谱；蒸发光散检测器 [中图分类号]R282 [文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2007）04（c）-019-02 芪苓升白颗粒由黄芪、白苓等组成，具有补血益气的功能，用于气血亏损证所引起的头昏眼花、白细胞减少症。黄芪是本方中的君药，黄芪甲苷是黄芪的主要有效成分，作者用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法测定芪苓升白颗粒中黄芪甲苷含量，现报道如下： 1材料与方法 1.1 仪器与试剂 Agilent 1100高效液相色谱仪；SEDEX75蒸发光散色检测器；Agilent色谱工作站。KQ-50超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。黄芪甲苷对照品购于中国药品生物制品检定所，芪苓升白颗粒为中试样品，共3批。甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。 色谱柱为Agilent C18（150 mm×4.6 mm ，5 μm），流动相为乙腈。水（35∶65） ，柱温为室温，流速为1 ml/min，SEDEX75蒸发光散色检测器漂移管温度为50℃，载气压力4.0(Bar)。在此条件下，黄芪甲苷和样品中其他组分色谱峰可达基线分离，且与其它相邻色谱峰分离度大于1.5，按黄芪甲苷峰计算，理论板数应不低于4 000。 1.2 对照品溶液的配制 精密称取黄芪甲苷对照品约10 mg，用甲醇配成1.0 mg/ml的溶液。 1.3 供试样品的制备[1] 黄芪甲苷的富集采用正丁醇萃取-氨水洗涤的方法，以下是对富集方法的考察。 1.3.1 正丁醇萃取次数考察分别精密称定称取同一批号的颗粒3份，每份约2.0 g，样品用20 ml蒸馏水超声20 min溶解后，先固定每次水饱和正丁醇用量为30 mL，考察不同萃取次数的区别，记录峰面积，结果发现，水饱和正丁醇萃取次数以4次为好，每次30 mL。 2.3.2 氨水洗涤次数考察分别精密称定称取同一批号的颗粒3份，每份约2.0 g，样品用20 ml蒸馏水超声20 min溶解后，用水饱和正丁醇萃4次，每次30 ml。固定每次40%氨水用量为40 ml，考察不同洗涤次数的区别，记录峰面积。结果发现，40%氨水洗涤次数以3次为好，每次40 ml。 1.3.3 超声提取时间的考察分别精密称定称取同一批号的颗粒3份，每份约2.0 g，样品用20 ml蒸馏水超声溶解，固定超声功率为250 W，考察不同超声时间，即超声30 min，45 min，60 min对颗粒剂中黄芪甲苷提取率的影响，结果发现，超声30 min即可提取完全。 1.3.4供试样品的制备通过以上实验，确定供试样品制备方法如下：精密称取颗粒约2.0 g，用20 ml蒸馏水超声30 min溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和正丁醇萃取4次，每次30 ml，合并正丁醇层，用40%氨水洗涤3次，每次40 ml，挥去正丁醇，用甲醇定容至5 ml即得。 1.4 阴性液的制备 除黄芪外，其余中药及辅料按本品处方依照制备工艺制成缺黄芪的颗粒，按1.3.3法制备得到阴性液。 2 结果 2.1 专属性试验 精密吸取黄芪甲苷对照品溶液、芪苓升白颗粒样品供试液、阴性空白液各10 μl，注入色谱仪中，由色谱图可知，在黄芪甲苷对照品色谱相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性液在此峰位无吸收，说明此测定方法专属性强，色谱图见图1。 2.2 线性关系 配制一系列不同浓度的黄芪甲苷对照品溶液，浓度为0.1、0.2、0.4、0.8、1.0 mg/ml，精密吸取上述溶液各10 μl进样，以进样量X的常用对数为横坐标，峰面积Y的常用对数为纵坐标作图，得黄芪甲苷的回归方程为lgY=1.17lgX+3.16, r=0.9995(n=5)，说明黄芪甲苷1.0～10 μg进样量的对数与峰面积对数有良好的线性关系。 2.3 精密度考察 取颗粒剂约2.0 g，精密称定。按1.3.3法下制备供试样品，进样10 μl，连续进样6次