HPLC法测定不同产地栀子中栀子苷含量.docVIP

HPLC法测定不同产地栀子中栀子苷含量摘 要:目的:测定不同产地栀子中栀子苷的含量。方法:采用外标法,大连依利特ODS(4.6mm×200mm,5μm)色谱柱,流动相:乙腈-水(15∶85),流速为1.0mL/min,柱温25℃,检测波长为238nm。结果:测得7产地的10批栀子中栀子苷含量最高为7.06%,最低为2.89%。结论:不同产地栀子中栀子苷含量由于土壤等各种因素的影响,差异较为明显。 关键词:栀子;栀子苷;高效液相色谱法 中图分类号:R284文献标识码:A文章编号:1673-2197(2009)06-0020-02 栀子为茜草科植物栀子(Gardenia jasminoides Ellis)的干燥成熟果实,为临床常用中药,其性寒味苦,无毒,入心、肝、肺、三焦经,具有泻火除烦、清热利尿、凉血解毒之功效。栀子药理研究表明其具有抗炎、镇静、镇痛、保肝利胆、抗凝血等作用[1],环烯醚萜类化合物和二萜色素类化合物是栀子的主要成分,也是其主要生物活性物质。栀子苷是栀子的主要活性成分,具有抗炎、解热、利胆等作用;水提取物有利胆、降压、抗菌消炎作用;醇提取物有解热、镇静作用。本文建立了HPLC测定栀子中栀子苷含量的方法[2],对7产地的10批栀子中栀子苷含量进行了测定,为中药栀子的质量评价提供科学依据。 1 仪器与试药 美国Agillent 1100高效液相色谱仪,二级阵列检测器,1100色谱工作站。栀子苷(Geniposide)对照品(批号110749-200309)购自中国药品生物制品检定所。乙腈和甲醇均为色谱纯,水为纯化水。药材及中试饮片样品购自不同产地,其中江西泰和、江西秀谷、浙江淳安各2批,江西永丰、湖南浏阳、浙江苍南、福建贯岭各1批。经广东食品药品职业学院中药标本馆鉴定为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 大连依利特ODS(4.6mm×200mm,5μm)色谱柱。流动相:乙腈-水(15∶85),流速为1.0mL/min,柱温25℃,检测波长为238nm,进样量10μL。色谱图见图1。 t / min 2.2 对照品溶液的制备 精密称取栀子苷对照品0.74mg,置于20mL容量瓶中,用50%甲醇溶解定容至刻度,制成含有栀子苷0.037mg/mL的储备液,即得。 2.3 供试品溶液的制备 称取栀子粉末(过2号筛)约0.50g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25mL,称定质量,超声20min,放凉,补重,用0.45μm微孔滤膜过滤即可进样。 2.4 线性关系考察 分别精密吸取栀子苷对照品储备液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL,在上述色谱条件下进行分析,以栀子苷色谱峰面积(Y)对质量浓度(X)绘制标准曲线。结果表明:栀子苷在0.74~37μg/mL范围内,峰面积与质量浓度呈良好的线性关系,回归方程为:Y=1153X+17.045,r=0.9996。 2.5 精密度试验 精密吸取栀子供试品溶液,在上述色谱条件下连续进样6次,分别测定栀子苷的峰面积,结果RSD为:0.09%。 2.6 重现性试验 取栀子6份各约0.50g,精密称定,按“2.3”项下操作,按上述色谱条件测定各样品的峰面积,计算各对照品的质量分数,栀子苷的RSD为:0.87%。 2.7 稳定性试验 取栀子供试品溶液,分别于0、1、2、4、6、8h在上述色谱条件下进样分析。计算栀子苷的含量,RSD为:0.18%,结果表明供试品在8h内稳定(n=6)。 2.8 加样回收率试验 称取已知量的栀子药材粉末约0.20g,精密称定,分别按相当于药材中栀子苷100%的量加入对照品溶液,按“2.3”项下操作,配制成高、中、低3个水平的加样供试品溶液(各水平平行操作3份),在上述色谱条件下进样分析,计算回收率。栀子苷的平均回收率为100.88%,RSD为1.75%。 2.9 样品测定 按上述方法对各产地栀子进行测定,进样量为10μL,以外标法计算栀子苷的含量。结果见表1。 3 讨论 (1)本文利用DAD检测器获得栀子苷的HPLC图谱;出峰时间适中,峰形对称,分离度符合要求;所用样品含量测定提取方法的方法学考察符合要求;简化了栀子含量测定的繁琐步骤,为探索制订完善栀子原药材、炮制饮片的质量标准提供了依据。检测结果表明:不同产地栀子含量差别明显,福建产栀子苷含量较高,为7.06%;江西永丰产栀子苷较低,为2.89%。2005年版药典规定栀子中栀子苷(C17H24O10)含量不得低于1.8%[3],说明10批药材含量均符合标准要求