HPLC法测定倒扣草中蜕皮甾酮含量.docVIP

HPLC法测定倒扣草中蜕皮甾酮含量摘 要：目的：建立HPLC法测定倒扣草中蜕皮甾酮含量的方法。方法：采用HPLC法，色谱柱为SinoChrom ODS-BP C??18?柱（250 mm×?4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈?水体积比（18∶82）；检测波长：248 nm；柱温：30℃；流速：1.0 mL.min??-1?。结果：蜕皮甾酮在0.25~2.5μg范围内具有良好的线性关系（r＝0.999 8），平均回收率为98.76%，RSD为0.72%。结论：该方法简便、快速、准确、具有良好的重复性和回收率，可作为蜕皮甾酮的定量分析方法。 关键词：HPLC；倒扣草；蜕皮甾酮 中图分类号：R284 文献标识码：A? 文章编号：1007-2349（2011）04-0068-02? 倒扣草，别名牛舌大黄、牛舌头、鱼鳞菜［1］，来源于苋科植物粗毛牛膝?Achyranthes aspera? L.的全草。性凉，味甘淡。有解表清热，利湿活血的功效，用于感冒发热、痢疾、疟疾、咽喉肿痛、脚气、水肿、淋病、跌打损伤等［2］。在全国各地均有分布，在四川是一味民间常用的中草药，用来治疗咽喉炎和扁桃体炎。有文献报道［3］，倒扣草当中含有蜕皮甾酮类物质，药理研究表明，蜕皮甾酮具有明显的抗动脉粥样硬化及抗脂质过氧化作用，能降低血清中胆固醇含量，减少血小板聚集性等作用。 本文以蜕皮甾酮为检测指标，采用高效液相色谱法测定倒扣草中蜕皮甾酮的含量。 1 仪器与试药 1.1 仪器 戴安高效液相色谱仪（P680A四元低压梯度泵，PDA-100二极管阵列检测器，TCC-100柱温箱，Chromeleon色谱工作站）；瑞士Precisa电子天平（XR 205SM-DR）；CQX25-06超声波清洗器（上海必能信超声有限公司，功率250 W，频率25 kHz）。 1.2 试药 蜕皮甾酮对照品（天津一方科技有限公司，纯度为99.99%）。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水。倒扣草，2009年9月采自四川省泸州市龙马潭区石洞镇，野生，经笔者鉴别为苋科植物粗毛牛膝的全草。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱为依利特 SinoChrom ODS-BP C??18?（250 mm×?4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈?水体积比（18∶82）；检测波长：248 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL#8226;min??-1?；进样量：10 μL。见图1。 A.对照品；B. 供试品；1. 蜕皮甾酮 2.2 对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥至恒重的蜕皮甾酮对照品适量，精密称定，置量瓶中，加甲醇制成每1 mL含蜕皮甾酮0.125 mg/mL的溶液，即得。 2.3 供试品溶液的制备 精密称取干燥倒扣草粉末（过40目筛）约2 g，用25 mL 80%甲醇超声提取30 min，过滤，并以甲醇分次洗涤容器和残渣，置水浴锅上挥干溶剂后，用色谱甲醇溶解，并转移至25 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。 2.4 线性关系考察 精密称取蜕皮甾酮对照品5.0 mg，置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取0.2、0.6、1.0、1.4、1.8 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取上述对照品溶液20 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录峰面积。以进样量（x）与对应的峰面积（Y）作回归处理，得标准曲线。Y=31.2172 x+0.252 3（r=0.999 8）。结果表明，蜕皮甾酮在0.25~2.5 μg，进样量与峰面积间均呈良好的线性关系。 2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液，注入液相色谱仪，测定峰面积值，重复进样6次。结果倒扣草蜕皮甾酮的RSD为0.29%。表明本法精密度良好。 2.6 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，分别于0.5、1、2、4、6、8 h分别精密吸取10 μL，测定峰面积值，结果倒扣草蜕皮甾酮的RSD=1.63%。可见供试品溶液在8 h内稳定性良好。 2.7 重复性试验 称取同一批倒扣草粉末5份，按2.3项下方法，制备供试液，分别精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，进行定量测定，结果倒扣草蜕皮甾酮质量分数RSD=0.61%。表明本法重现性良好。 2.8 加样回收率试验 称取已知含量倒扣草药材5份，每份加入适量对照品溶液，按2.3项下方法，制备样品溶液，分别精密吸取样品溶液10 μL，注入液相色谱仪，进行定量测定，计算加样回收率。结果倒扣草蜕皮甾酮的平均加样回收率为98.76%，RSD为0.72%。 2.9 样品测定 分别取上述倒扣草药材样品，按2.3项下方