miR-200c对TGF-β1刺激后人瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成影响.docVIP

miR-200c对TGF-β1刺激后人瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成影响[摘要]目的：观察转染miR-200c mimics 对人瘢痕疙瘩成纤维细胞（HKFs）胶原蛋白分泌的影响。方法：将miR-200c mimics用oligofectami脂质体转染人瘢痕疙瘩成纤维细胞后，3H-脯氨酸掺入法测加入 50μg／L剂量的转化生长因子(TGF-β1) 刺激前后胶原蛋白水平的变化。结果：转染miR-200c mimics后，胶原蛋白分泌水平降为正常皮肤成纤维细胞表达水平；经TGF-β1刺激后，其蛋白水平仍无明显变化。结论：miR-200c可明显抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原蛋白分泌，推测其机制是通过抑制TGF-β1生物学作用。 [关键词]miR-200c；人瘢痕疙瘩成纤维细胞；胶原蛋白；转化生长因子-β1 [中图分类号]R619+.6 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2012）02-0242-03 Effect of miR-200c on collagen secretion in TGF-β1-stimulated human keloid fibroblasts MENG Xi-yong (Department of Plastic Surgery,No.421 Hospital of Chinese PLA, Guangzhou 510318,Guangdong,China) Abstract: Objective To investigate the effect of miR-200c mimics on collagen secretion in human keloid fibroblasts(HKFs). Methods miR-200c mimics were transfected by oligofectami package. The collagen level was measured by 3H-proline incorporation method before and after HKFs were stimulated by transforming growth factor betal (TGF-β1) of the dosage of 50μg/L. Results The collagen level was decreased to the normal skin fibroblasts level and had no obvious change even after stimulated by TGF-β1. Conclusion miR-200c can inhibit the expression of collagen in HKFs.The mechanisms may be inhibit the biological effects of TGF-β1. Key words:miR-200c;human keloid fibroblasts;collagen;TGF-β1 瘢痕疙瘩是皮肤损伤如创伤、烧伤或手术后引发的以胶原过度沉积于真皮和皮下组织为特征的过度瘢痕化，其发病机制目前仍不明确，但公认为其是多种因素共同作用的结果。转化生长因子β1(transforming growth factor betal，TGF-β1)是已知的与瘢痕疙瘩形成关系最为密切、最具代表性的细胞因子，它的异常表达会促进病理性瘢痕的形成[1]。MicroRNA(miRNA)是一种小非编码RNA，通过调节基因表达影响多种生物学行为，包括细胞增殖、凋亡和分化[2-3]。miRNAs与瘢痕的研究报道较少，但已有大量报道表明miRNAs与多种皮肤病有密切关系[4]。例如miR-200家族在皮肤黑素瘤细胞的侵袭模式和形态差别均起不同的调节作用[5]。已证实miR-200c能够对抗并逆转TGF-β1诱导出现的上皮-间质转化[6],并且miR-200c在瘢痕疙瘩组织中表达比正常组织的低6.92倍[7]，基于此，本研究旨在探讨在人瘢痕疙瘩成纤维细胞（HKFs）中过表达miR-200c能否对抗TGF-β1诱导胶原蛋白分泌的作用，为瘢痕疙瘩的基因治疗提供依据。 1 材料和方法 1.1 材料：TaKaRa总RNA提取试剂盒、反转录试剂盒购自大连宝生物工程有限公司；荧光标记FAM-miR-200c mimics及其nagetive control、miR-200c特异性 qRT-PCR检测试剂盒（SYBR Green法，含人miR-200c特异性引物和U6内参）购自上海吉玛公司，TGF-β1购自美国Santa Cruz公司；胎牛血清、RPMI