MMP-9-TIMP-1及肝癌侵袭转移及病毒抗原表达相关性探究.docVIP

MMP-9/TIMP-1及肝癌侵袭转移及病毒抗原表达相关性探究【摘要】目的：探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及其抑制剂-1（TIMP-1）在人肝癌及癌旁组织中的表达和肝癌生物学行为及病毒抗原表达之间的关系。方法：应用免疫组织化学法（SP）研究40例肝癌及癌旁组织中MMP-9、TIMP-1和HBsAg、HCV抗原的表达。结果：MMP-9在肝癌和癌旁组织表达阳性率分别为70.25%和75%，癌组织明显减低（P＜0.01）。TIMP-1在肝癌组织和癌旁组织中的表达阳性率分别为57.5%和62.5%，肝癌中的表达较癌旁肝组织表达减低，但差异无显著性。转移组癌及癌旁组织MMP-9的表达显著高于无转移组（P＜0.05）；而TIMP-1则明显低于无转移组（P＜0.05）。肝癌、癌旁组织MMP-9、TIMP-1表达随着无病毒感染、单一病毒感染、双重感染分组而增高，且MMP-9表达与病毒抗原表达明显相关（P＜0.05）。HBsAg、HCV虽可在癌组织及癌旁组织表达，但有一定差异：HBsAg主要在癌旁组织表达（70%），高于癌组织表达（27.5%）；而HCV在癌组织表达（27.5%）与癌旁组织表达（30%）水平相当。结论：MMP-9、TIMP-1在肝癌及癌旁组织中的表达明显增高，可能对于判断肝癌的侵润、转移有重要价值；HBV、HCV感染可能与MMP-9表达增加有关。 【关键词】癌，肝细胞；基质金属蛋白酶-9；组织金属蛋白酶抑制剂-1；乙型肝炎抗原，丙型肝炎抗原 文章编号：1009-5519（2007）05-0649-03 中图分类号：R73 文献标识码：A 本研究检测40例肝病（HCC病人手术切除肿瘤组织、癌旁组织标本MMP-9、TIMP-1及HBsAg、HCV抗原的表达，旨在探讨MMP-9、TIMP-1在肝癌及癌旁组织中的表达和肝癌生物学行为及HBsAg、HCV抗原表达之间的关系。 1 资料与方法 1.1 一般资料：我院肝胆外科2001年1月～2005年12月手术切除原发性肝癌（PHC）标本40例，病理诊断符合2001年肝癌诊断标准[1]。男32例，女8列，年龄28～70岁，中位年龄52岁。10例正常对照组肝组织为非肝脏疾病死亡后24小时内尸解的肝脏标本。肝癌患者术前均未进行过化学及放射治疗。其中ALT高于正常者12例，AFP＞400 mg/ml者8例，肿瘤直径＜3 cm（小肝癌型）5例，3～5 cm（结节型）16例，＞5 cm（巨块型）19例；包膜完整3例，无包膜或包膜不完整37例；有转移或门静脉癌栓者10例；肿瘤高分化程度者3例，中等分化程度者34例，低分化者3例。 1.2 仪器与试剂：全自动免疫组织化学仪购自美国Lab Version公司，兔抗人MMP-9单克隆抗体、鼠抗人TIMP-1单克隆抗体、鼠抗人HBsAg单克隆抗体、鼠抗人丙肝病毒抗原单克隆抗体、SP免疫组织化学试剂盒。 1.3 方法：（1）组织标本：肝癌标本选自癌内，癌旁组织选取癌与周围正常组织交界处（与癌组织距离＜2 cm），正常肝组织取自尸解标本，经10%甲醛固定，常规石蜡包埋，制备4 μm厚连续切片，贴附于涂有APES的载玻片上，烤片30分钟。（2）免疫组化学：①石蜡切片经二甲苯、梯度乙醇至水化，0.01 mmol/L磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗1次；②3%的H2O2浸泡10分钟，0.01 mmlo/L PBS振洗5分钟，共3次；③微波炉中高火2分钟，常温下自然冷却；④滴加正常血清，室温下10分钟，甩去多余液体不洗；⑤滴加适当稀释的第一抗体，37 ℃湿盒内1小时，PBS振洗5分钟，共3次；⑥滴加生物素化的第二抗体，37 ℃湿盒内15分钟，PBS振洗5分钟，共4次；⑦滴加辣根过氧化物酶标记链霉卵白素，37 ℃湿盒内15分钟，PBS振洗5分钟，共4次。步骤②～⑦在全自动免疫组织化学仪中进行；⑧DAB显色；⑨复染核，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。免疫组织化学实验同时做阴性对照切片（PBS代替一抗）。 1.4 结果判断：MMP-9、TIMP-1及HBsAg、HCV抗原标记均以细胞浆出现棕黄色颗粒或胞核胞浆同时呈现棕色为阳性细胞。采用双盲法，根据阳性细胞所占百分比，无明显阳性反应细胞为阴性（-），阳性细胞百分率＜25%为弱阳性（+），25%～50%为中等阳性（++），50%～57%阳性（+++），＞75%为强阳性（++++）。 1.5 统计学方法：采用卡方检验、秩和检验及行列变量的相关检验。 2 结果 2.1 MMP-9、TIMP-1在肝癌及癌旁组织的表达：MMP-9、TIMP-1在肝癌及癌旁组织的阳性率分别为70.25%（29/40）、75%（30/40）和57.5%（23/40）、62.5%(25/40