NADPH氧化酶4在高糖促进HUVECs内活性氧产生机制中作用.docVIP

NADPH氧化酶4在高糖促进HUVECs内活性氧产生机制中作用[摘要] 目的：研究在高浓度葡萄糖刺激状态下，人脐静脉内皮细胞（HUVECs）内活性氧的主要来源。方法：Ⅱ型胶原酶消化法分离培养人脐静脉内皮细胞，流式细胞术检测细胞内活性氧的生成，RT-PCR及Western blot检测细胞内NADPH氧化酶4（NOX4）的表达。结果：高糖处理HUVECs后细胞内ROS升高、NOX4表达明显上调；NOX抑制剂DPI能够抑制NOX4表达的上调和细胞内ROS的升高。结论：高糖处理HUVECs时细胞内ROS升高主要来源于NOX4。 [关键词] 葡萄糖；HUVECs；活性氧；NADPH氧化酶4 [中图分类号] R34[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）06（b）-011-03 The role of NADPH oxidase in intracellular ROS generation stimulated by high concentration of glucose JIN Juan (Department of Medicine, Changde Vocational Technical College, Changde 415000, China ) [Abstract] Objective: To study the main source of ROS generated in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) while stimulated by high concentration of glucose.Methods:Human umbilical vein endothelial cells was isolated by type Ⅱ collagenase, Intracellular ROS generation was measured by flow cytometry, NOX4 expression in HUVECs was detected by RT-PCR and Western blot.Results:High concentration of glucose could increase ROS generation and NOX4 expression; DPI, the specially inhibitor of NADPH oxidase, could attenuated these effects. Conclusion:NOX4 was the main source of ROS generation in HUVECs cultured with high concentration of glucose. [Key words] Glucose;HUVECs;ROS;NOX4 动脉粥样硬化是糖尿病的严重并发症之一，血管内皮细胞损伤是动脉粥样硬化(atherosclerosis, As)的始动因素。因此，降低细胞内活性氧的水平是保护内皮细胞功能完整性及防治糖尿病并发动脉粥样硬化的关键途径之一[1]。在高水平葡萄糖状态下，内皮细胞功能失调，其中氧化应激起重要作用。氧化应激指的是活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生大于机体的清除速率而在体内蓄积的状态。 内皮细胞内参与ROS产生的酶体主要有NADPH氧化酶(nicotinamide vadenine dinucleotide phosphate oxidase，NOX)、黄嘌呤氧化酶、线粒体电子传递链、不耦联的一氧化氮合酶等[2]，其中NOX可能是血管内皮细胞中ROS的主要来源。内皮细胞中主要表达NOX家族中的NOX4[3]。据文献报道[4,5]，在高葡萄糖刺激条件下，内皮细胞中ROS生成增加，并可导致细胞凋亡，但这是否与NOX4相关尚不清楚。本实验用高浓度葡萄糖处理人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)，并给予NOX的抑制剂DPI预处理，以甘露醇为高渗对照，用流式细胞仪检测细胞内ROS的产生，以探讨ROS产生的主要来源，并观察NOX4 mRNA及蛋白的表达水平。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1主要试剂新鲜脐带来自常德职业技术学院附属医院；M199培养基、Ⅱ型胶原酶、DPI、Trizol、反转录试剂盒为Invitrogen产品；胎牛血清购自Hyclone；DCFH－DA荧光探针购自江苏碧云天公司；葡萄糖、甘露醇为北京化学试剂公司产品；PCR引物为赛百盛合