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PCR及ELISA检测乙型肝炎病毒标志物比较探究【摘要】 目的 探讨乙型肝炎病毒HBV-DNA与常见HBV血清免疫学标志物之间的相互关系及其临床检测意义。方法采用PCR法对HBV-DNA、ELISA法对HBV血清免疫学标志物同时进行检测,数据用SPSS 11.0统计软件处理。结果899例11种常见模式HBV-DNA阳性率依次为90.48%、79.12%、73.91%、66.67%、62.12%、30.68%、7.79%、7.69%、1.29%、8.54%、0.94%。HBV-DNA与HBsAg(P0.01)、HBeAg(P0.01)和抗HBc(P0.01)明显相关。结论HBV血清免疫学标志物、HBV-DNA的检测都很重要。HBsAg、HBeAg、抗HBc和HBV-DNA有很好的相关性和相似的流行病学意义,但两者不可互相替代。 【关键词】 聚合酶链反应；酶联免疫吸附；乙型肝炎病毒 我国是乙型肝炎高发区，约1亿人口为乙型肝炎表面抗原携带者。目前常用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中的HBV血清免疫学标志物来间接了解乙型肝炎的感染情况，近年来，迅速推广应用的聚合酶链反应(PCR)技术能直接检测乙型肝炎病毒DNA，为HBV复制状态、传染性及考核抗病毒疗效提供直接依据。本研究应用PCR法和ELISA法对899例门诊和住院的HBV感染者血清同时进行检测，对两种方法做出比较分析。 1 材料与方法 899例血清均来自2003年10月～2004年10月在我院门诊及住院的患者。用ELISA法检测HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe和抗HBc，同时用PCR检测HBV-DNA。ELISA乙肝检测试剂盒由上海科华实业技术公司提供，PCR试剂盒由深圳宝安公司提供，PCR仪为PE公司9600扩增仪。各项目检测均严格按照试剂盒说明书进行。 2 结果 2.1 11种HBV感染模式与PCR检测结果关系（表1）。899例血清11种常见模式HBV-DNA阳性率依次为90.48%、79.12%、73.91%、66.67%、62.12%、30.68%、7.79%、7.69%、1.29%、8.54%、0.94%。1～3种模式PCR检测阳性率较高，第1种模式（俗称“大三阳”）用PCR检测阳性率达到90.48%，第2种模式（俗称“小三阳”）PCR检测阳性率达到79.12%。另外，第11种模式（“两对半”五项全阴性）中有两例HBV-DNA为阳性，值得注意。 2.2 乙型肝炎病毒标志物与HBV-DNA的关系（表2）。899例血清中HBsAg(+)321例，其中PCR检测HBV-DNA(+)者205例，占63.86%。HBsAg(-)578例，其中PCR检测HBV-DNA(+)者21例，占3.63%. HBeAg(+)65例，其中PCR检测HBV-DNA(+)者55例，占84.62%。HBeAg(-)834例，其中PCR检测HBV-DNA(+)者171例，占20.50%。用统计软件SPSS 11.0行McNemar检验。 3 讨论 聚合酶链反应(PCR)是从分子水平检测病毒DNA或RNA，它在体外以病毒DNA为模板，特异地反复制靶DNA，拷贝数可达100万倍。因此，它可以检测出pg级或fg级的HBV-DNA [1,2]。只要病原体存在，机体就会有其核酸序列存在，因而用PCR及其相关技术检测病原体基因成为临床诊断病原体感染的有效方法之一。由于PCR技术敏感、特异且操作简便，加之近年来商品化PCR试剂盒的广泛应用，使PCR技术越来越成为病原体检测中一个必不可少的工具[3]。 本研究结果发现，前六种HBsAg(+)模式321例中，PCR法检出205例，阳性检出率为63.86%。第1种模式（大三阳）PCR检出阳性率最高，达90.48%。第2种模式（小三阳）PCR检出阳性率为79.12%，仅次于第1种模式。第3种PCR阳性检出率为73.91%。前三种HBsAg(+)模式PCR阳性检出率达81.41%（127/156），可以看出HBV血清标志物与HBV-DNA密切相关。同时也说明这三种HBV标志模式的HBV-DNA复制率最高,传染性最强。其余模式HBV-DNA复制水平相对较低，传染性弱。另外，不能认为HBeAg阴性者不需再查HBV-DNA[4] ，在HBeAg(-)834例中PCR检出HBV-DNA(+)者171例，占20.50%。可见HBeAg阳性不等于HBV-DNA全为阳性，且第11种模式两例乙肝“两对半”全阴者HBV-DNA为阳性，故ELISA法不能取代PCR法检测。 在HBsAg(+)321例中，HBV-DNA(-)者有116例，占36.14%，比例较高，这可能是由于乙型肝炎病毒整合于宿主肝细胞中，而血清