VEGF在Ⅰ期非小细胞肺癌患者淋巴结表达及临床意义.docVIP

VEGF在Ⅰ期非小细胞肺癌患者淋巴结表达及临床意义[摘要] 目的 通过检测I期非小细胞肺癌(NSCLC)患者淋巴结中血管内皮生长因子(VEGF)的表达,确定微转移灶的存在及其与肿瘤复发、转移和预后的关系。方法 选择 1999～2007年大连市第五人民医院胸外科经过根治性手术(肺叶或全肺切除、系统性淋巴结清扫术)的常规病理检查证实为Ⅰ期NSCLC患者33例的246枚淋巴结。所有患者术前均未接受过放疗、化疗,均有详细完整的临床随访资料。本次研究采用LSAB免疫组化VEGF染色,进行光镜病理学检查。结果 33例患者246枚淋巴结中有10例(30.3%)患者的12枚(4.9%)淋巴结中VEGF阳性表达。有或无VEGF阳性表达的患者复发转移率差异有统计学意义(80.0% vs 26.1%,χ2=7.015,P=0.016),VEGF阳性表达患者的中位生存期显著短于VEGF 阴性表达者(21个月vs. 60个月,P=0.016);Cox单因素风险模型(P=0.004)和多因素风险模型(P=0.004)均显示存在淋巴结微转移的I期NSCLC患者预后不良。结论 VEGF免疫组化染色检测淋巴结微转移与I期NSCLC复发转移相关,有助于更加精确的分期,可以作为I期NSCLC患者根治术后的一个预后指标,并为其综合治疗提供理论依据。 [关键词] 非小细胞肺癌; 淋巴结; 微转移;血管内皮生长因子; 免疫组织化学 [中图分类号] R734.2[文献标识码] A[文章编号] 1673-9701(2009)28-06-03 目前关于检测I期非小细胞肺癌(NSCLC)淋巴结微转移,评价其预后意义及其对综合治疗的指导意义研究较少。我们采用血管内皮生长因子(VEGF)作为微转移的标记物,检测I期NSCLC患者的淋巴结微转移灶。 1材料与方法 1.1病例选择的标准 选择1999～2007年大连市第五人民医院胸外科经过根治性手术(肺叶或全肺切除、系统性淋巴结清扫术)的常规病理检查证实为Ⅰ期NSCLC患者33例的246枚淋巴结。所有患者术前均未接受过放疗、化疗,均有详细完整的临床随访资料。男19例,女14例;平均年龄56岁(32～68岁)。组织学类型鳞癌16例、腺癌12例、腺鳞癌5例;病理分期Ia 15例,Ib 18例。 1.2LSAB法免疫组化染色 1.2.1主要试剂兔抗人VEGF-C抗体,VEGFR-3抗体和鼠抗人CD31抗体购自美国Santa Cruz公司,SP免疫组化试剂盒,DAB显色试剂盒(武汉博士德生物技术有限公司)。病理组织切片机(西德LEICA);生物组织摊片烤片机(国产CS-Ⅲ型);自动脱水机(国产TS-12型)。 1.2.2免疫组织化学染色步骤将石蜡包埋组织标本置于-4℃冰箱内,冷冻后取出,切成2张5μm 厚组织薄片,并置于多聚赖氨酸处理过的载玻片上,经摊片、烤片后进行VEGF免疫组织化学染色。将5μm 厚的石蜡切片常规脱蜡,逐级水化,先经3%H2O2阻断内源性过氧化物酶,0.01mol/L 枸橼酸缓冲液行抗原修复,然后依次加入正常小牛血清(1∶10),VEGF-C(1∶100),CD31(1∶100),VEGFR-3(1∶200),生物素化羊抗鼠抗体(1∶200),SP 复合物(1∶200)。以上各步之间均经37℃恒温箱孵育30min,PBS冲洗(小牛血清除外),最后DAB染色,DAB显色:取lmL蒸馏水,加试剂盒中A、B、C试剂1滴,混匀后加至切片,室温显色,镜下控制反应时间在5～30min之间,蒸馏水洗涤。苏木素轻度复染;脱水透明,封片,待检。 1.2.3染色结果评判标准以细胞膜及细胞浆出现棕黄色显色为阳性。只要切片中见到一个VEGF染色阳性的细胞,就认为阳性,即淋巴结中有微转移灶的存在(本实验是在大连市第五人民医院病理科的协助下完成,参与实验操作及阳性细胞计数的2名病理医师均对患者的临床资料不了解)。 1.2.4实验对照以VEGF阳性表达的乳腺癌组织切片为阳性对照,以抗体稀释液PBS代替第一抗体作为阴性对照。 1.3统计学处理 本研究的所有数据均采用SPSS11.5软件包进行处理,其中百分比(率)差异性的比较采用Fishers精确卡方检验;Kaplan- Meier乘积限法计算生存率,并绘制生存曲线;Log-rank法比较生存期;Cox回归模型用于预后的单因素分析和多因素分析。所有数据统计结果以P0.05为差异有统计学意义。生存患者和非肿瘤原因导致的死亡患者按删失值处理。随访方式包括门诊随访,电话随访及信件随访等。 2结果 2.1检测淋巴结中VEGF(+)细胞 我们采用了33例患者的常规组织病理检查阴性的淋巴结共246枚,其中发现12枚(4.9%