γ干扰素体外诱导大鼠脾脏树突状细胞IDO表达实验探究.doc

γ干扰素体外诱导大鼠脾脏树突状细胞IDO表达实验探究[摘要] 目的 探讨γ干扰素（IFN-γ）诱导大鼠脾脏树突状细胞（DC）的吲哚胺2，3-双加氧酶（IDO）的表达情况。方法 大鼠脾脏分离培养DC，进行形态特征观察，流式细胞术检测DC的表型及确定其纯度。分别用不同浓度的IFN-γ诱导作用DC后，荧光定量RT-PCR测定IDO mRNA的相对表达水平。结果 大鼠脾脏分离培养的DC纯度可达80%以上，培养10d的DC具有典型的树枝状突起，CD80、CD86的阳性表达分别达75%、90%以上。IDO mRNA的表达水平随IFN-γ的浓度的增大逐渐增加。结论 IFN-γ在体外能诱导大鼠脾脏DC的IDO表达。 [关键词] 树突状细胞；吲哚胺-2，3-双加氧酶；γ干扰素 [中图分类号] R322.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2009）12-48-03 Study of γ-interferon-induced Expression of Indoleamine 2，3-Dioxygenase of Rat Spleen-derived Dendritic Cells in Vitro ZHANG Jing1XU Jun2 1.Shanxi Medicine University；2. General Surgery of Shanxi Province People’s Hospital，Taiyuan 030012 [Abstract] Objective To study the effect of γ-interferon（IFN-γ） on the indoleamine 2，3-dioxygenase（IDO） expression in rat spleen-derived dendritic cells（DC）. Methods DC were isolated and cultured from spleen in rat. The morphology of DC observed by microphotograph. The purity and phenotype were analyzed with flow cytometry. Separately with different concentrations of IFN-γ induced DC，relative expression of IDO mRNA were detectec by fluorescence quantitative RT-PCR. Results The purity of cultured DCs above 80%.DCs cultured at 10 days with typical dendritic morphogy. The positive expression of CD80 and CD86 were more than 75% and 90%.Expressions of IDO mRNA with the concentration of IFN-γ increased gradually increase. Conclusion IFN-γ could induce the expression of IDO of rat spleen-derived DC in vitro. [Key Words] Dendritic cells； Indoleamine 2，3-dioxygenase； γ-interferon 树突状细胞（DC）是机体内功能最强的抗原提呈细胞，不仅参与对外来抗原的免疫反应，而且在诱导免疫耐受中也起着重要的作用。DC可通过多种机制诱导免疫耐受。最近有研究表明，DC还可能通过产生吲哚胺-2，3-双加氧酶（IDO）来降低T淋巴细胞活性、抑制T淋巴细胞增殖[1-2]，诱导免疫耐受。因此，上调DC细胞的IDO表达可能为诱导移植后免疫耐受的新策略。本研究观察在γ干扰素（IFN-γ）作用下DC的IDO表达情况，为今后IDO应用于防止移植免疫排斥反应提供一定的实验基础。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1主要试剂RPMI1640培养液、胎牛血清购自美国Hyclone公司，重组大鼠粒细胞集落刺激因子（rmGM-CSF）、重组大鼠白细胞介素4（rmIL-4）、重组大鼠干扰素γ（IFN-γ）购自美国Pepro Tech公司，脂多糖（LPS）购自美国Sigma公司，PE标记的抗大鼠OX62购自英国AbD serotec公司，PE标记的抗大鼠CD80、FITC标记的抗大鼠CD86购自美国eBioscience公