不同产地乌药4种有效成分含量测定.doc

不同产地乌药4种有效成分含量测定【摘要】目的：考察不同产地乌药有效成分的含量，为乌药的质量标准提供一定的依据。方法：采用HPLC法测定不同产地乌药中乌药内酯、乌药醚内酯、异乌药内酯及去甲异波尔定的含量。结果：不同产地乌药中乌药内酯的含量在0.3516～1.4403 mg/g之间；乌药醚内酯的含量在0.8724～3.1380 mg/g之间；异乌药内酯的含量在0.5792～1.8281 mg/g之间，去甲异波尔定的含量在2.9488～11.9372 mg/g之间。结论：不同产地的乌药中4种有效成分的含量差异较大。 【关键词】乌药；HPLC；乌药内酯；乌药醚内酯；异乌药内酯；去甲异波尔定 乌药为樟科植物乌药Lindera aggregate (Sims) Kosterm．的干燥块根，具有活血化瘀，行气止痛等功效，主要用于寒凝气滞，胸腹胀痛，气逆喘急，膀胱虚冷等症[1]。主产于浙江、湖南、安徽、广东、广西等地，均系野生，其中以浙江台州、金华为道地药材[2]。乌药中主要含有挥发油、异喹啉类生物碱及呋喃倍半萜三大类成分，共同构成了乌药的化学特征，其中最能体现乌药特征的成分应是呋喃倍半萜及其内酯类成分，包括乌药内酯、乌药醚内酯、异乌药内酯等成分[3]。药理研究表明，乌药总碱具有抗类风湿关节炎的活性，去甲异波尔定是其中主要成分[4]，2010年版《中国药典》乌药项下除乌药醚内酯含量测定外，也增加了去甲异波尔定的含量测定。文献研究发现，乌药的质量控制指标单一，主要集中在乌药内酯或乌药醚内酯的含量测定上[5,6]。本实验采用高效液相测定不同产区乌药内酯、乌药醚内酯、异乌药内酯及去甲异波尔定的含量，较《药典》更加全面的检验了乌药中有效成分，为乌药的质量评价提供一定的依据。 1 仪器与试药 1.1仪器 Agilent-1100高效液相色谱仪（DAD检测器、自动进样器、在线脱气、四元泵）、KQ-300VDB型数控超声波清洗器、A4DL型自动纯水蒸馏器、BS210S型电子天平。 1.2试药 乌药内酯对照品购自中国药品生物制品检定所，乌药醚内酯、异乌药内酯等对照品均购自上海顺勃生物工程技术(云南)公司；去甲异波尔定对照品由四川省维克奇生物科技有限公司提供；乌药药材采集于浙江、广西、广东、江苏、河北等地，经广东医学院中药鉴定教研室鉴定为樟科植物乌药Lindera aggregate (Sims) Kosterm．的干燥块根；乙腈、甲醇均为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为纯净水。 2方法与结果 2.13种呋喃倍半萜类成分含量测定 2.1.1色谱条件 色谱柱：迪马 kromasil C18 (250 mm × 4.6 mm 5 μm) ；流动相甲醇―乙腈―水（35：25：40）；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：235 nm。进样量为10 μl。 2.1.2 对照品溶液的制备 分别精密称取乌药内酯对照品1.52 mg，乌药醚内酯对照品2.31 mg，异乌药内酯对照品3.54 mg置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。 2.1.3供试品溶液制备 取乌药粉末（50目）1.0 g，精密称定，置50 mL锥形瓶中，加甲醇50 mL，称重，超声30 min，放至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，过0.45 μm微孔滤膜，即得。 2.1.4 标准曲线的制备 分别精密吸取混合对照品溶液1、2、4、6、8、10 μL，注入液相色谱仪中，测定3种对照品的色谱峰面积。结果乌药内酯的标准曲线为：y = 1287.74x ?8.7915（R2=0.9993）；乌药醚内酯的标准曲线为y = 1081.24x 6.7915（R2=0.9995）；异乌药内酯的标准曲线为：y = 1203.19x 0.7412（R2=0.9996）；3种对照品的线性范围分别为：0.0608～0.608 μg；0.0924～0.924 μg；0.1416～1.416 μg。 2.1.5 精密度的考察 精密吸取乌药内酯、乌药醚内酯及异乌药内酯对照品溶液10 μL，按上述色谱条件重复进样5次，测定峰面积积分值，结果乌药内酯、乌药醚内酯、异乌药内酯的峰面积的RSD(n=5)分别为2.39％，2.08％，1.62%。 2.1.6 稳定性的考察 分别取乌药同一份供试品溶液，按照2.1.3项下的方法进行提取，采用上述液相色谱条件，在0、4、8、16、24 h进样10 μL测定，结果乌药内酯、乌药醚内酯、异乌药内酯的RSD(n=5)分别为2.47％，2.22％，1.78%。 2.1.7 重复性的考察 取同一批乌药药