不同产地连钱草药材中总黄酮成分含量测定.doc

不同产地连钱草药材中总黄酮成分含量测定(1.武汉科技大学医学院，湖北 武汉 430065；2.武汉大学药学院，湖北 武汉 430072)?? 摘 要：目的：建立连钱草药材中总黄酮成分含量的测定方法。方法：分光光度法。结果：7个湖北产地连钱草的总黄酮含量平均为64.78mg#8226;g-1，三个混淆品的总黄酮含量平均为34.37mg#8226;g-1。总黄酮含量的不同可在一定程度上区别连钱草和其混淆品。结论：连钱草的总黄酮含量与其栽培方式、采收时间密切相关；多数产地的连钱草与其混淆品相比，总黄酮含量显著增加，故总黄酮的含量测定可作为连钱草真伪鉴别的参考依据。 ? 关键词：连钱草；分光光度法；黄酮；含量测定? 中图分类号：R284文献标识码：A文章编号：1673-2197（2009）01-0021-03?? 连钱草Herba Glechomae，别名活血丹、铜钱草等，《中国药典》收载为唇形科植物活血丹Glechoma longituba(Nakai)Kupr的干燥地上部分，具有利湿通淋、清热解毒、散瘀消肿的功能[1]，主治尿路感染、尿路结石、胃及十二指肠溃疡、黄疸性肝炎、肝胆结石等症，在治疗胆结石、跌打损伤及断肢再造方面有独特作用[2-3]。我国连钱草资源极为丰富，除新疆、甘肃、青海、西藏以外其它各省均有连钱草分布[4]。本实验[5-7]测定了10种不同来源连钱草药材（7种湖北产地连钱草，3种连钱草的混淆品种）中总黄酮的含量，并进行了比较分析，为连钱草药材的质量控制提供了评价依据。? 1 材料? 1.1 仪器? UV-2101PC紫外可见分光光度计（日本岛津）；CQ250超声波清洗仪(上海超声波仪器厂)。? 1.2 试药? 芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号0080-9705）；亚硝酸钠(分析纯，太仓化工二厂，批；三氯化铝（分析纯，中国金山区兴塔美兴化工厂，批号990829）；氢氧化钠（分析纯，威尔昆化学试剂有限公司上海华美药房经销，批；连钱草样品见表1。 2 方法? 2.1 对照品溶液的配制? 精密称取120℃常压干燥至恒重的芦丁对照品0.0110g，置于100mL容量瓶中，用60mL 60%乙醇超声溶解（容量瓶密塞），放冷，用60％乙醇定容，得到0.11mg#8226;mL-1芦丁对照品溶液。? 2.2 供试品溶液的配制? 精密称取经干燥的连钱草粉末约0.5g，置100mL具塞容器中，精密加60mL 60%乙醇，密塞，称重，超声提取30min。放冷，密塞，再称重，用60%乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液即得供试品溶液。? 3 结果与讨论? 3.1 测定波长的选择[7]? 精密称取芦丁对照品5mg，置于25mL容量瓶中，加60%乙醇约15mL，超声使其溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，摇匀，得芦丁标准溶液（0.2mg#8226;mL-1）。精密吸取芦丁标准溶液8mL，置于25mL容量瓶中，加5%亚硝酸钠溶液1mL，摇匀，放置6min，加三氯化铝试液1mL，摇匀，放置6min，再加5%的氢氧化钠10mL，加水至刻度，摇匀，于波长200~800nm范围内扫描，发现在510nm处有一最大吸收峰。精密称取2g连钱草粗粉，置于具塞锥形瓶中，加50mL 60%乙醇，超声50min，过滤，取续滤液，不显色，直接于波长200~800nm范围内扫描；再取续滤液1mL，照对照品芦丁一样显色后，于波长200~800nm范围内扫描，发现在504nm处有一最大吸收峰。见图1。? 3.2 标准曲线? 精密量取芦丁对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、7.0mL，置于10mL容量瓶中，分别加入60%乙醇使成7mL，精密加入5%亚硝酸钠0.3mL，摇匀，放置6min；精密加入10%三氯化铝0.3mL，摇匀，放置6min；加入1mol/L的氢氧化钠2mL，用60%乙醇定容，摇匀，以不加芦丁对照品溶液其它同法操作得到的溶液作为空白对照，在504nm处测定吸光度。求得回归方程为：C(mg#8226;mL-1)=0.075215A+0.001532(r=0.9996，n=6)；芦丁对照品在0.01~0.07mg#8226;mL-1范围内呈良好的线性关系。? 3.3 精密度实验? 取芦丁对照品溶液适量，配成高、中、低三个浓度，每个浓度3份，分别显色后测定吸收度。结果表明，测定方法的精密度良好（表2）。? 3.4 稳定性试验? 取对照品溶液3.0mL，进行显色，每隔5min测定一次吸收度，共测定至40min，计算总黄酮的平均含量为0.0297mg#8226;mL