不同剂量电离辐射对大肠癌HCT-8细胞凋亡影响.doc

不同剂量电离辐射对大肠癌HCT-8细胞凋亡影响摘要： 目的：本研究通过检测不同剂量电离辐射对大肠癌细胞凋亡的影响，探讨逆转肿瘤多 药耐药的方法。方法：采用流式细胞术检测大肠癌多药耐药HCT-8细胞凋亡的变化。结果： 与假照射组相比，2Gy大剂量照射后HCT-8细胞凋亡小体百分率明显增加(P0．01)，先 给予低 剂量照射(50mGy，100mGy，200mGy)后，再给予大剂量照射，HCT-8细胞凋亡小体百分率进 一步增加(P0．01)，其中以100mGy+2Gy组增加明显，与单纯2Gy大剂量照射组比较， 无统计学意义。结论：结果表明大剂量辐射可以明显诱导大肠癌多药耐药HCT-8细胞凋亡。 关键词：辐射；大肠癌；多药耐药；细胞凋亡 中图分类号： R735.3+4 文献标识码： B 文章编号： 1008-2409(2008)05-0921-03 大肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，治疗以手术为主，但是大肠癌又是一种全身性疾病， 对于手术后及失去手术机会或转移性大肠癌患者均应该应用化疗、放疗等综合治疗，以提高 患者生存质量，降低复发率，延长患者生存期，提高治愈率［１］。但化疗的最大障 碍是肿瘤 细胞的多药耐药性，特别是大肠癌细胞的多药耐药(MDR)原发性高表达及继发性高表达，使 得大肠癌细胞的多药耐药性明显高于其它肿瘤，使化疗的效果明显低于其它肿瘤。本研究通 过检测不同剂量电离辐射对大肠癌多药耐药细胞凋亡的影响，探讨逆转肿瘤多药耐药的方法 。 1 材料与方法 1．1 细胞株 ?人大肠癌HCT-8细胞株，由卫生部放射生物重点实验室提供。细胞培养在 含10％小牛血清的RPMI1640培养液内，置37℃、5％CO?2培养箱内饱和湿度培 养，0．25％胰蛋白酶消化传代。 1．2 照射条件 用国产X．S．S．250(FZ)型固定式X射线 深部治疗机照射，电压200kV，电流10mA，滤板0．5mmCu+1．0mmAl。低剂量(0．05~ 0．2Gy)全身照射，靶皮距247．3cm，剂量率0.0125Gy／min。较高剂量(2Gy)全身照 射，靶皮距56cm，剂量率0．287Gy／min。 1．3 细胞耐药模型的制备 取处于对数生长期 细胞，在无菌条件下操作。分别以35、350和 3500μg/L阿霉素(ADM)孵育3d，而 后恢复 3d，镜下观察细胞形态及数量，发现350μg/L组细胞数量适中形态完好，故以400 μg/L ADM作为HCT-8细胞耐药模型刺激浓度。取处于对数生长期细胞，在无菌条 件下操作。首先以 50μg/L ADM孵育3d，而后恢复3d，倍量(100μg/L)孵育3d，再次恢复3d ，如此反复至 浓度增至400μg/L，收取细胞待用。同时设空白对照(不加药物刺激)及一直用同 一剂量刺激组做平行对照。 1．4 照射模型的制备 将耐药细胞分为以下5组：A：假照射组；B： 大剂量组(2Gy)； C：0．05Gy+2Gy组(先给予0．05Gy低剂量照射后再给予2Gy大剂量照射，以下同)；D：0．1Gy+2Gy组；E：0．2Gy+2Gy。大、小剂量间隔4h 照射，大剂量照射后24h收取细胞待测。每组设重复样品 4个。 1．5 流式细胞术(FCM)检测大肠癌细胞凋亡 本实验采用美国B-D公司生产的FACScan流式细胞仪，激发光源为15mW氩离 子激光，波长 488nm，应用间接免疫荧光，FCM检测。将HCT-8单细胞悬液，PBS洗2次，弃 上 清，吸取细胞，注入到75％冷乙醇中固定，4℃放置过夜。从75％冷乙醇固定的HCT-8单细 胞 悬液中取1×106个细胞，PBS洗涤2次，加RNase(0．1mg／ml)100μl，37℃反应30min，P BS洗 2次，加PI(0．05mg／ml，含0．03％Triton X-100)0．5ml，4℃避光反应30min，进行FCM 检 测。凋亡小体变化数据用Lysis软件分析。每组均重复3次(n=3)。 1．6 统计学方法 研究结果以平均值±标准差 (±s)表示，两两比较采用t 检验。 2 结果 对HCT-8细胞照射，大、小剂量间隔4h照射，大剂量照射后24h收取细胞待测。将HCT -8 细胞用75％乙醇固定，采用流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡小体百分率的变化。由表1可见 ， 与假照射组相比，2Gy大剂量照射后HCT-8细胞凋亡小体?百分率明显增加(P0．01) ，先给予低 剂量照射(50mGy，100mGy，200mGy)后，再给予大剂量照射，HCT-8细胞凋亡小体百分率进 一步增加 (P0，01)，其中以100mGy+2Gy组增加明显，与单纯2Gy大剂量照射组比较， 无统计学意义。