反相高效液相色谱法测定血浆中帕罗西汀浓度.docVIP

反相高效液相色谱法测定血浆中帕罗西汀浓度?摘 要 目的：建立高效液相色谱法测定血浆中帕罗西汀浓度的方法。方法：采用岛津LC-VP型高效液相色谱仪，YWG-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温：25 ℃；激发波长为295 nm，发射波长为350 nm；流动相为乙腈和pH3.2的25 mM的磷酸盐缓冲液（35∶65，v/v）；流速为1 mL/min。采用内标法。结果：帕罗西汀的血浆线性范围是2.5～100 ng/mL，r=0.998 9，平均回收率为91.37%，稳定性RSD均小于8%。结论：本方法灵敏度高，分离效果佳，方便实用。? 关键词 高效液相色谱法 帕罗西汀 血药浓度? 中图分类号：R917 文献标识码：B 文章编号：1006-1533(2007)09-0417-02? 帕罗西汀是目前市场上广泛应用的一种5-羟色胺再摄取抑制剂（SSRI），是目前抗抑郁治疗的主要药物。帕罗西汀的疗效和不良反应与其血药浓度有明显相关性，并且血药浓度个体差异非常大，常规剂量下，血药浓度范围可从10 ng/mL波动至30 ng/mL,这就需要对药物进行治疗药物浓度测定，以保证个体能达到有效的血药浓度，保证疗效。帕罗西汀血药浓度测定有多种方法，如HPLC-MS、HPLC-FL、HPLC-UV［1～3］，但这些方法往往步骤繁琐或成本较高，不适合常规应用。本文介绍一种操作简便、成本低廉、适用于常规应用的反相高效液相色谱法来测定血浆中帕罗西汀的浓度。?? 1 仪器与试药? 1.1 仪器? 日本岛津LC-VP型高效液相色谱仪，包括LC-10ATVP输液泵、RF-10AXL荧光检测器、CLASS-VP色谱工作站、DGU-12A在线脱气机；80-2台式离心机（上海手术器械厂）。? 1.2 试药? 帕罗西汀标准品（浙江尖峰药业有限公司提供，批号；氟西汀标准品（常州四药制药有限公司提供，批号（内标物）；甲醇（色谱纯）；乙腈（色谱纯）；其余试剂均为分析纯。?? 2 方法与结果? 2.1 色谱条件? 色谱柱：反相YWG-C??18?柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温：25 ℃；激发波长为295 nm，发射波长为350 nm；流动相为乙腈和pH3.2的25 mM的磷酸盐缓冲液（35∶65，v/v）；流速为1 mL/min；进样量为50 μL。? 2.2 标准溶液制备? 精密称取帕罗西汀标准品置于容量瓶中，用甲醇溶解，配成1 mg/mL的标准溶液，于-20 ℃储存备用。精密称取内标物氟西汀标准品置于容量瓶中，用甲醇溶解，配成1 mg/mL的标准溶液，于-20 ℃储存备用。? 2.3 血浆样品处理? 精密吸取血浆样品1 mL，加0.2 mL的0.1 MNaOH，加入50 μL的内标物，摇匀，加乙醚3 mL，旋涡振荡3 min，以3 000转/min的速度离心10 min，静置10 min，分离有机层。重复萃取1次，合并上层液，于37 ℃水浴中氮气流吹干，残余物用200 μL流动相溶解，取50 μL进样。帕罗西汀保留时间约为10.35 min，内标氟西汀保留时间约为12.11 min。两者分离完好，无血浆内源物干扰。? 2.4 标准曲线及最低检测限? 取1 mL空白血浆7份，加50 μL的内标物，定量（50 μL）加入帕罗西汀标准溶液，混合均匀，使其浓度分别为?2.5?、5.0、10.0、25.0、50.0、75.0、100.0 ng/mL。按血浆样品处理项进行操作，测定帕罗西汀和内标物的峰面积，以浓度对峰面积比值进行回归，得到标准曲线方程：Y＝?24.918?+18.876X，r=0.998 9，本方法的最低检测限是1.0 ng/mL（最低检测浓度为仪器信号噪音的3倍）。? 2.5 提取回收率? 取1 mL空白血浆3份，加50 μL的内标物，定量（50 μL）加入帕罗西汀标准溶液，混合均匀，使其浓度分别为?2.5?、50、100 ng/mL，按血浆样品处理项进行操作，得到峰面积比值。取标准溶液用流动相稀释成上述3个浓度，加50 μL的内标物，混合均匀后，不经提取，直接取50 μL进行进样，得到峰面积比值。两个峰面积比即为提取回收率。结果见表1。 2.6 精密度? 取空白血浆溶液按照提取回收率项下配制低、中、高这3种浓度(2.5，10，100 ng/mL)，按血浆样品处理项操作，在1 d内分别重复进样5次，得3种浓度的日内重复性。在5 d内分别每天重复进样，得3种浓度的日间重复性。结果见表2。 2.7 稳定性? 取空白血浆，按照回收率项下配制低、中、高这3种浓度(2.5