复合刺激对亚健康大鼠模型耐疲劳能力及血清SOD、MDA影响.doc

复合刺激对亚健康大鼠模型耐疲劳能力及血清SOD、MDA影响摘 要：目的：观察复合刺激对亚健康大鼠模型耐疲劳能力及其血清SOD、MDA的影响。方法：采用游泳运动、睡眠剥夺和夹尾刺激等复合因素制造亚健康大鼠模型，检测动物体重、进食量、耐疲劳能力及血清SOD、MDA等指标的变化。结果：模型组动物体重低于正常组，饮水量、进食量均明显少于正常组，5 min内不动时间明显多于正常组，血清SOD活性明显低于正常组，MDA明显高于正常组。结论：复合因素造模法兼顾了亚健康的成因和表现，模型动物的宏观表现和微观指标均具备亚健康的基本特征，该造模方式具有一定的科学性和合理性。 关键词：复合刺激；亚健康；耐疲耐；SOD；MDA 中图分类号：R965.1 文献标识码：A 文章编号：1007-2349（2011）08-0054-02 亚健康的防治是目前中西医共同关注的问题。缺乏公认的动物模型是制约亚健康研究深入开展的关键问题之一。过劳、睡眠障碍、精神压力过大既是亚健康的诱发因素，又是亚健康的主要表现。因此，课题组采用游泳运动、睡眠剥夺和夹尾刺激等复合因素作用于Wistar大鼠，以模仿亚健康的成因和症状。为了明确其微观机制，正确评价该造模方式的科学性与合理性，课题组又开展了进一步研究。 1 材料与方法 1.1 实验动物 清洁级健康雄性Wistar大鼠，3月龄，雌雄各半，体重（200±20）g，由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，合格证号：1016152。适应性饲养1周后，进行游泳运动初筛，剔除不擅游泳者，完全随机法分为正常组（10只）、模型组（10只）。 1.2 主要仪器及试剂 SOD试剂盒，批南京建成生物试剂公司；MDA试剂盒，批南京建成生物试剂公司；80-2型离心机，上海手术器械厂；752型紫外光栅分光光度计，山东高密分析仪器厂；YC-300L型医用冷藏箱，中科美菱；FM50型制冰机，北京长流科学仪器公司。 1.3 动物模型的建立 采用应激和运动致疲劳相结合制造动物模型。①运动造模 参考文献［1］稍加改变。制作160 cm×80 cm×60 cm的注水鼠箱，水深30 cm，水温25 ℃左右。第1周每天8点将大鼠放入水中，强迫游泳20 min。第2、3、4周分别增加游泳时间为30、40、50 min。游泳过程中动物如体力不支沉入水中，及时捞出，防止溺亡；②睡眠剥夺造模 参考文献［2］稍作改变。每天游泳运动结束后，在造模箱中放置10个直径为6.3 cm、高31 cm的平台（平台面距水面约1.0 cm）。动物可以上台休息，箱顶盖金属网，动物可自由摄食饮水，但不能睡眠。若其睡眠，则由于肌肉张力松弛而落人水中。造模一直持续到20：00点；③应激造模 参考文献［3］稍加改进。20：00点将动物从平台上取下，放入饲养笼。用尖端缠有纱布的止血钳夹其中一只大鼠尾部，令其与其他大鼠撕打，模仿人类生存环境不佳，竞争激烈，精神压力大的情况。夹尾以不破皮、不流血为度。每次刺激2 h。定期更换夹尾大鼠，使造模结束时每只大鼠夹尾次数基本相同。22∶00点去除止血钳，全天造模结束。连续造模4周，共28 d。 1.4 指标检测 记录造模最后1周，每笼大鼠每天的进食和饮水量，造模结束后测量各组动物体重变化，采用鼠尾悬挂试验测试动物抗疲劳能力，测试结束后禁食12 h，断头取血，测血清超氧化物质化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量。 1.5 统计学处理 各组数据均以（Ax-G±s ）表示，运用SPSS10.0数据包进行统计学处理。以α=0.05为标准，采用单因素方差分析，用LSD法两两比较组间数据的差异。 2 结果 2.1 一般情况 模型组动物表现为皮毛干枯、脱落，精神萎靡、活动量减少，易激惹等情况。正常组则皮毛光亮润泽，活泼多动，发育正常，体重增长正常。 2.2 2组动物体重变化比较 造模结束后测量各组动物体重变化，结果见表1。 2.3 2组动物饮水量、进食量变化比较 记录造模第4周每笼大鼠每天的进食和饮水量，7 d数据平均结果见表2。 2.4 2组动物鼠尾悬挂试验测试结果 造模结束后，将各组大鼠尾端1 cm的部位穿过中央钻有直径1cm的孔的水平有机玻璃板，板离地面1m左右，使动物呈倒挂状。动物为克服不正常的体位而挣扎活动，但活动一定时间后，出现间断性“不动”显示“失望”状态。计算5min内的不动时间，并同时观察大鼠挣扎幅度及疲劳状态［4］。结果模型组动物的挣扎幅度明显小于正常组动物，呈现间断性挣扎，挣扎时间明显少于正常组，间歇次数明显多于正常组。正常组则挣扎幅度较大，挣扎时间长，挣扎过程中虽也有间歇，但间歇次数少，间歇时间短。2组动物5 min内不动