水稻二化螟抗药性检测技术规范-饲料混毒法.PDF

水稻二化螟抗药性检测技术规范-饲料混毒法 1 范围 本标准规定了饲料混毒法检测二化螟（Chilo suppressalis (Walker)）抗药性的方法。 本标准适用于杀虫剂对二化螟室内毒力测定和抗药性评估。 2 术语和定义 2.1 抗药性 Resistence 昆虫忍耐杀死正常种群大部分个体的药量的能力，并在其种群中发展起来的能力。 2.2 敏感基线 Susceptib ility baseline 在某种农药使用之前，该种药剂对昆虫敏感品系的毒力基线及 LD 或 LC 。 50 50 2.3 饲料混毒法 Artificial d iet incorporation bioassay method 二化螟幼虫接触、取食混药的人工饲料而中毒死亡的毒力测定方法。 3 试剂与材料 3.1 生物试材： 二化螟： 4龄初期幼虫。 3.2 试验试剂与药剂： 试剂为分析纯，药剂为原药。 4 主要仪器设备 电子天平（感量 0.0001g），手持搅拌机，料理机，毛笔，眼科镊，移液器，平底玻璃管（直径 3cm， 高 5cm），1000ml 烧杯（直径 13cm，高 15cm），恒温培养箱、恒温养虫室或人工气候箱，高温高压湿热 灭菌锅，微波炉。 5 试验步骤 5.1卵块采集、管理及混毒饲料配制 5.1.1 卵块采集： 1 在成虫盛发期，可从田间诱蛾带回室内产卵或从水稻田直接采集二化螟卵块。 5.1.2 卵块孵化及幼虫管理 在玻璃培养皿（直径 9cm）中放入滤纸 3-4 片，并加入适量灭菌蒸馏水保湿，将卵块放入其中，保 湿培养至卵块黑头时，将黑头卵块放入装有饲料的玻璃管中，每个玻璃管中放入 1-2个卵块，塞上棉花 塞。待幼虫从卵块中孵出并爬至饲料上后，将卵块残余部分从玻璃管中挑出来，然后将幼虫放置于温度 28±1℃，相对湿度 60%-70%，光照比（L：D）16：8hrs（下光照）的光照培养箱中培养至 4 龄。 5.1.3 药剂配制 用电子天平或移液器称量若干原药，加入水或有机溶剂（如丙酮、二甲基甲酰胺等）溶解配制成药 剂母液，然后按所需浓度的量用移液器加入到已装有 30ml含 10％（m/v） Triton-X 100（或吐温 80） 灭菌蒸馏水的烧杯（直径 13cm，高15cm）中，充分混匀后备用。 5.1.4 人工饲料配制方法 按中国农科院植保所（2009）的人工饲料配方进行配制（见附录 B）。具体如下： （1） 将各组分按配比称重，备用； （2） 将新鲜的茭白切碎，加入水，放入料理机中磨碎并匀浆，匀浆后将其倒入盛有大豆粉、酵母粉、 干酪素和蔗糖的灭菌桶中，将上述 5 种组分充分搅拌均匀后，置于高压蒸汽灭菌锅中，于 125 ℃下灭菌 30min，灭菌完毕后，取出备用； （3） 琼脂中加入纯净水，用微波炉加热并煮至完全溶解后，将其倒入步骤（2）中已灭菌好的饲料中， 用手持搅拌机搅拌混匀，并冷却至 60℃左右备用； （4） 将称好的抗坏血酸钠、尼泊金酯、山梨酸、胆固醇、氯化胆碱、威氏盐、复合维生素放入烧杯 中，用少量温开水溶解，然后将其倒入步骤（3）中的饲料中，再加入 40%的甲醛，搅拌直至完 全均匀； （5） 将搅拌好的饲料倒入无菌的保鲜盒中，完全冷却凝固后存放于 4℃冰箱中备用。 5.1.5 混毒人工饲料的配制方法 按上述方法制备人工饲料，在加入 40%的甲醛并搅拌均匀后，在预先盛有 30ml 药液（含10％（m/v） 的 Triton-X 100（或吐温80））的烧杯中快速加入 270 克人工饲料，并用手持搅拌机充分搅拌混匀制得 混毒饲料，然后快速地用 10ml 移