初始污染检测.ppt

2008年5月 初始污染菌检测 一次性使用医疗用品 初始污染菌检测 江苏省医疗器械检验所 一次性器具室 微 生 物 基 础 知 识 微生物基础知识 无菌技术 初始污染菌检测关键步骤 致病菌检查 微 生 物 基 础 知 识 微生物与微生物学 微 生 物 的 分 类 细 菌 形 态 特 征 细菌个体形态 细 菌 形 态 特 征 细 菌 形 态 特 征 细 菌 形 态 特 征 细 菌 形 态 特 征 细 菌 形 态 特 征 细 菌 形 态 特 征 描 述 细 菌 形 态 特 征 细菌基本结构 细 菌 形 态 特 征 革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌的细胞壁结构比较 真 菌 形 态 特 征 霉菌个体形态 霉 菌 形 态 特 征 酵 母 菌 形 态 特 征 微 生 物 群 体 生 长 规 律 微 生 物 群 体 生 长 规 律 微生物操作技术－无菌环境是前提！ 试验环境的要求及无菌操作 环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的 单向流空气区域内进行。 阳性实验室、检查间分离。 严格按无菌操作,防止实验室的培养物被其他外来微生物污染；避免操作者自身被微生物感染。 无菌操作在有洁净级别的实验室中进行，与试验相关的金属器械、玻璃器皿、稀释剂等应经过灭菌处理；其他的材料应经过表面消毒、紫外线照射消毒后，再带入实验室 。 无 菌 技 术 无 菌 技术 无 菌 技 术 无 菌 技 术 无 菌 技 术 无 菌 技 术 无 菌 技 术 无 菌 技 术 无 菌 技 术 无 菌 技 术 无 菌 技 术 无 菌 技 术 消 毒 灭 菌 技 术 消 毒 灭 菌 技 术 消 毒 灭 菌 技 术 培 养 基 的 基 础 知 识 培 养 基 的 基 础 知 识 培 养 基 的 基 础 知 识 细 菌 计 数 初始污染菌检测 初始污染菌检测：目前使用标准GB 15980（一次性使用医疗卫生标准）。本标规定了一次性使用医疗用品灭菌、消毒前、后的卫生标准。本标准对一次性使用医疗用品（包括灭菌的和消毒的一次性使用医疗用品）生产、装配，包装车间等生产过程和生产工人手提出卫生的质量控制。 引用标准：GB7918.2、GB8368、GB8369、中华人民共和国药典。 初始污染菌检测 初始污染菌检测 初始污染菌检测 7、结果计算公式： 平均菌落数×稀释倍数菌数 菌数/每件次（或g） =——————————————————— 件次或重量（g） 注意事项： 供试品的取样必须在万级环境中100级净化条件下，无菌操作，防止污染。 应严格遵守无菌操作，同时消除抑菌成份的干扰。 初始污染菌检测 初始污染菌检测 初始污染菌检测 初始污染菌检测 初始污染菌检测 初始污染菌检测 控制菌的检查:参照《药典》2005版、GB15979-2002 1.大肠埃希菌 BL增菌培养→MUG培养→靛基质试验 具体检查见表1： 结果判断 MUG阳性、靛基质阴性，或MUG阴性、靛基质阳性，则应取胆盐乳糖培养基的培养物划线接种于曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基的平板上，培养18～24小时。若平板上无菌落生长、或生长的菌落与表3所列的菌落形态特征不符，判供试品未检出大肠杆菌。若有可疑菌落，进行IMVic。 表3大肠埃希菌菌落形态特征 表1 大肠杆菌的检查 表2结果判断 2.金黄色葡萄球菌 营养肉汤增菌培养→平板（高盐）划线培养→观察→血浆凝固酶试验 具体检查方法见表3： 表3 金黄色葡萄球菌的检查 表4 金黄色葡萄球菌菌落形态特征 平板上无菌落生长或生长的菌落不同于表4所列特征，判供试品未检出金黄色葡萄球菌。 平板上生长的菌落与表4所列的菌落特征相符或疑似，应挑选2～3个菌落，分别接种于营养琼脂培养基斜面上，培养18～24 小时。取营养琼脂培养基的培养物进行革兰染色，并接种于营养肉汤培养基中，培养18～24小时，作血浆凝固酶试验。 表5金黄色葡萄球菌鉴定 3.铜绿假单胞菌 增菌培养→平板划线培养→观察 具体检查方法见表8： 表5 铜绿假单胞菌的检查（一） 菌落特点: 铜绿假单胞菌典型菌落呈扁平、无定形、周边扩散、表面湿润，灰白色，周围时有蓝绿色素扩散。 如供试品平板上无菌落生长或生长的菌落与上述菌落特征不符，判供试品未检出铜绿假单胞菌。 如平板生长的菌落特征与上述菌落特征相符或疑似，应挑