高效提取富含多糖多酚的果实组织中总RNA的方法.PDF

※基础研究 食品科学 2009, Vol. 30, No. 13 29 高效提取富含多糖多酚的果实组织中 总 RNA 的方法 栾福磊，韩友生，邵 毅，卢丞文，陈安钧，李 玲，田慧琴，罗云波，朱本忠 * ( 中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京 10083) 摘 要：果实组织中往往富含多糖和多酚，由此导致了果实组织比其他植物组织总 RNA 的提取要困难的多。本研 究以番茄为模式材料，探索自制TRIZOL 试剂法从富含多糖的果实组织中提取总 RNA 。以葡萄为模式材料探索PVP 改进法提取富含多酚的果实组织的总RNA 的方法。经过纯度、得率检测证明所研究的两种新方法能够保证从富含 多糖和多酚的果实组织中获得高得率和高质量的总RNA 。 关键词：果实组织；总 RNA ；TRIZOL ；PVP Effective Isolation of High-quality Total RNA from Polysaccharide or Polyphenol-rich Fruits LUAN Fu-lei ，HAN You-sheng ，SHAO Yi，LU Cheng-wen ，CHEN An-jun ，LI Ling ， TIAN Hui-qin ，LUO Yun-bo ，ZHU Ben-zhong* (College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, Beijing 100083, China) Abstract ：The isolation of large quantities of good-quality RNA from fruit tissues rich in polysaccharide or polyphenol has been a long-standing problem for researchers. In this study, a self-prepared TRIZOL reagent was used to extract total RNA from tomato (rich in polysaccharide). Also, an improved PVP method was applied to extract total RNA from grape (rich in polyphenol). Compared to guanidinium thiocyanate method, the above methods resulted in higher purity and yield of total RNA from tomato and grape, respectively. Key words ：fruit tissue ；total RNA ；TRIZOL ；PVP 中图分类号：TS255.1 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2009)13-0029-04 传统的分子生物学实验中，从细胞中分离提取的总 叶片等用普通的异硫氰酸胍法和十六烷基三甲基溴化胺 RNA 的纯度与质量对于许多后续分子生物学实验至关重 (CTAB)法就能获得大量且高质量的总 RNA 。但对于富 要，例如，Northern 杂交，RT-PCR ，cDNA 文库的 含多糖和多酚的植物果实，异硫氰酸胍法和 CTAB 法提 构建等实验的成败在很大程度上取决于总 RNA 的提取质 取的总 RNA 纯度往往较低，得率往往与microRNA 实验 量。近年来由于发现 microRNA 能够在转录后水平广泛