免疫分析法与转基因食品检测-农药名网.ppt

筛（查）选（Screening）的快速、半定量检测方法之一 5.2 转基因食品的分析 转基因食品属于新资源食品 转基因食品的安全性是国际、国内的热点话题 安全性如何评价？ 转基因食品检测技术：主要有PCR（核酸水平）；其他检测手段还有ELISA（蛋白质水平）、质谱分析、近红外光谱技术等 60兆个细胞； 23对染色体（单细胞内的染色体拉成直线  大约有1.83米长）； 20000~25000个基因（比老鼠多  1%）； 30亿个碱基对（单倍体） 我们这个星球上最伟大的秘密 转基因食品检测原理： 通过基因扩增技术（PCR），在体外由引物介导的DNA聚合酶催化的聚合反应，能够在短时间快速准确的将一个目的序列大量复制。过程是首先在90-95℃的高温下使模板DNA变性，双链解开，然后降低温度至40-60℃，两引物分别与单链模板互补区退火，形成局部双链，延伸扩增的结果是得到目的片段的复制品。 变性、退火、延伸，3步构成一个循环，目的基因扩增一倍…….。 第一步：DNA提取 把样本细胞核中所含有DNA提取出来，然后进行一定的纯化，排除样本中的杂质。 第二步：PCR扩增 PCR的中文名为聚合酶链式反应技术，简单的说，PCR扩增这一步就是把所需要的片段通过酶促反应，在PCR仪上进行大量复制，放大到通过某些专用仪器可以看到的程度。 第三步：后PCR反应 这一步主要是上DNA测序仪检测的准备阶段，将双链的DNA打开，加一些检测用的内标试剂，主要是用来标记检测的片段长度。 第四步：毛细管测序仪检测 由于DNA带有电荷，通过毛细管电泳的方法，不同片段DNA长度的电泳速度不同，在同样的电压，同样的电泳时间下，泳动的距离不同，这些长短不同距离可以通过前期加入的内标测量分辨出来，同时可通过一定的软件显示在电脑上，方便检测人员处理和分析数据。 复习思考题 简述免疫分析法的基本原理。 简述食品分析中常用的免疫分析方法及特点。 转基因食品概念及安全性。 简述转基因食品的检测方法。 简述PCR基本反应步骤。 * * * * 第五章 免疫分析法与转基因食品检测 5.1 免疫分析法 5.2 转基因食品的分析 免疫分析方法：利用抗体与抗原的特异性结合特性来 实现食品中污染物检测的方法。 优点：具有专一性、灵敏度高等优点。 其灵敏度与常规的仪器分析一致，适合现场筛选！ 检测对象：生物性污染物(如病原微生物和寄生虫)及其代谢产物(如生物毒素)的检测和分析，化学污染物，如农药、兽药抗生素和激素等的残留分析。 免疫学方法的种类：非常多，目前用于食品安全检测的有：免疫凝集和沉淀法、放射免疫法、荧光免疫法、胶体金免疫层析法、酶联免疫法（ELISA）等。 5.1 免疫分析法 ELISA方法为定量方法，灵敏度和特异性最高，单个检测成本最低，灵敏度可达ng/kg级。 ELISA方法 意大利Tecna公司 美国Idexx公司 英国Randox公司 Laboratories公司 德国R-Biophanm公司 国家质量监督检验检疫总局曾经推荐Randox公司的ELISA试剂盒作为动物激素和抗生素残留的首选筛查方法。 放射免疫方法 放射免疫检测系统中最成功的是美国CHARM Science公司Charm6600/7600抗生素快速检测系统，该检测系统利用专一性受体来识别同一类抗生素中的母环，并以最快的速度同时检测同一抗生素族在样品中的残 留情况。 目前CharmⅡ7600检测系统对于β-内酰胺类、氯霉素类、四环素类、磺氨类、邻氯青霉素及碱性磷酸酶的检测已被FDA认可。 采用同位素标记技术来检测抗原抗体的高灵敏度方法，检测限一般低于10-6g/kg！ 胶体金免疫层析法 以竞争性免疫为基础理论，用胶体金标记特异性抗体并固化在玻璃纤维上，被检组分与固化在硝酸纤维素膜上的抗原与胶体金标记抗体竞争性的结合，以固化抗原的检测点是否显色及显色深浅来判断是否有待测组分及含量，此方法是速测技术研究的热点。 试纸条方法为定性方法，其特点为操作简单，样本处理后检测时间短，但灵敏度比ELISA试剂盒低5～10倍，特异性差，仅适合残留限量要求不高的少数药物的粗筛。 生物传感器技术 生物传感器由生物识别元件、信号转换器和检测器等几部分组成。其工作原理是：生物识别元件中的生物材料(例如抗体)特异性地识别待