基因敲除对黄酒酵母高级醇生成量的影响毕业论文.doc

基因对黄酒酵母高级醇生成量的影响毕业论文1 前 言 1 1.1 黄酒概述 1 1.2 黄酒风味物质概述 1 1.2.1 高级醇对黄酒风味的影响 2 1.2.2 酯类对黄酒风味的影响 3 1.2.3 其他类物质对黄酒风味的影响 3 1.3 黄酒发酵过程中高级醇的形成与控制 3 1.3.1 高级醇的形成机理 3 1.3.2 影响黄酒中高级醇含量的主要因素 6 1.3.3 降低黄酒中高级醇含量的主要措施 7 1.4 低产高级醇酵母菌株的研究进展 8 1.4.1 诱变育种 8 1.4.2 细胞融合育种 9 1.4.3 基因工程育种 9 1.5 本课题的立题依据及研究内容 10 1.5.1本课题的立体依据 10 1.5.2 本课题的主要研究内容 11 2 材料与方法 13 2.1 材料与仪器 13 2.1.1 主要试剂 13 2.1.2 主要实验仪器 14 2.1.3 菌种与质粒 15 2.1.4 主要培养基 15 2.1.5 主要溶液 16 2.2 分析方法 17 2.2.1 CO2失重的测定 17 2.2.2 酒精度的测定 17 2.2.3 还原糖的测定 17 2.2.4 挥发性风味物质含量的测定 18 2.2.5 生长曲线的测定 18 2.3 实验方法 19 2.3.1 引物设计 19 2.3.2 各目的基因片段的获得 21 2.3.3 重组质粒的构建 23 2.3.4 酵母转化 25 2.3.5 G418抗性基因的去除 26 2.3.6 黄酒发酵实验 26 3 结果与讨论 28 3.1 BAT1基因敲除对黄酒酵母高级醇生成量的影响 28 3.1.1 BAT1基因的验证 28 3.1.2 重组质粒pUC-BABK的构建 28 3.1.3 BAT1基因敲除突变株的获得及验证 30 3.1.4 BAT1基因敲除对黄酒酵母高级醇生成量的影响 32 3.1.5 小结与讨论 33 3.2 BAT1、BAT2基因双敲除对黄酒酵母高级醇生成量的影响 33 3.2.1 BAT1、BAT2基因双敲除突变株的获得及验证 33 3.2.2 突变株与出发菌株生长性能的比较 34 3.2.3 BAT1、BAT2基因双敲除对黄酒酵母高级醇生成量的影响 35 3.2.4 小结与讨论 36 3.3 HOM2基因一个等位基因敲除对黄酒酵母高级醇生成量的影响 37 3.3.1 HOM2基因的验证 37 3.3.2 重组质粒pUC-HABK的构建 38 3.3.3 HOM2基因一个等位基因敲除的突变株的获得及验证 40 3.3.4 HOM2基因一个等位基因敲除对黄酒酵母高级醇生成量的影响 41 3.3.5 遗传标记基因KanMX的去除 42 3.3.6 小结与讨论 44 3.4 HOM2基因两个等位基因敲除对黄酒酵母高级醇生成量的影响 44 3.4.1 重组质粒pUC-HB1A1K的构建 44 3.4.2 HOM2基因两个等位基因敲除的突变株的获得及验证 47 3.4.3 突变株与出发菌株生长性能的比较 48 3.4.4 HOM2基因两个等位基因敲除对黄酒酵母高级醇生成量的影响 49 3.4.5 小结与讨论 50 4 结 论 51 5 展 望 52 6 参考文献 53 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 58 8 致 谢 59 前言 1. 黄酒概 黄酒是我国的民族特产，至今已经有6、7酒[1]具有丰富、酒精度低特点营养性，富含糖、肽等，达20种之多近年来，国家政策支持、黄酒企业积极引导消费，黄酒行业发展势头良好，行业整体规模稳步扩大2006年至2010年，国的黄酒产量由63.8万千升增至134.1 万千升，合计增长110%，年均复合增长率为20%2012年全国黄酒实现主营业务收入134.32亿元，同比增长12.89%利润总额14.49亿元，同比增长7.33%工业销售产值136.40亿元，同比增长18.42%1-8月，全国规模以上黄酒企业销售额同比增8%，利润增19%左右，较其他酒种相对稳定如消费市场地域性导致市场拓展艰难、无序竞争导致价值低估身价降低、传统观念影响导致创新能力不够过分强调传统酿造技术导致生产效率难以提高等。 黄酒风味物质概 黄酒独特的生产工艺赋予了其丰满、醇和、柔顺、圆润、浓郁、悠长的感觉，也赋予了其醇、香、柔、爽的独特风味[7]。黄酒这种独特的风味特征，是众多风味物质综合反应的集中体现。黄酒中的风味物质种类非常丰富，主要包括醇类、酸类、酯类、 醛类及羰基化合物等，其中酸类是黄酒中的重要呈味物质，而醇类、酯类和醛类则是黄酒香气的骨架成分，这些风味物质之间具有风味累加、相杀作用或风味协同作用，从而形成了黄酒特有的复合香[8-10]。其中，高级醇和酯类是黄酒中最重要的两类风味物质，对促进黄酒酒体丰满、浓厚，并增加酒的协调性起着重要作用