两步法制备大豆异黄酮操作单元研究.pdfVIP

133 ※工艺技术 良晶科学 2005．、，|0t．26．No．12 722型分光光度计上海第三分析厂；Uv一2401PC 表1 培养基中水份对菌种产酶影响 TabIe1 EffectofwaterinfermentationmedlaOn enzymeyieId Labscale 型紫外可见分光光度计(Shimadzu)；超滤系统 TFF美国。 1．1．2 母种培养制备 黄豆芽1009，加水1000ml，煮沸30min，纱布过 2 2．2 碳源对菌种产酶影响 滤，滤液加一定量麸皮，分装三角瓶，1 1℃灭菌 30min，冷却后接种培养，制备发酵用母种。 按1：1加水的固体培养基中，分别加入可溶性淀 1．2 方法 粉、玉米粉、葡萄糖。实验结果表明，一定量的可 溶性淀粉、玉米粉均可增加诱导B一葡萄糖苷酶的产酶 1．2．1 B．葡糖糖苷酶发酵生产 活性，但玉米粉效果优于可溶性淀粉，而葡萄糖则抑 麸皮、玉米粉等组成固态培养基经121℃灭菌30min 制菌种产生B．葡萄糖苷酶(表2)。根据实验结果，说 后，冷却，接种生产母种，于30℃培养5～6d。用 明菌种WD201分泌B一葡萄糖苷酶是诱导酶，在菌种发 pH4．6缓冲液振荡提取，经离心后获取B．葡糖糖苷酶。 酵基质中有葡萄糖存在情况下，菌种优先表达葡萄糖组 1．2．2 D一葡糖糖苷酶活性测定 成酶基因，利用葡萄糖作为糖原，同时葡萄糖及分解 1．2．2．1 葡萄糖标准曲线制备 代谢产物抑制产B一葡萄糖苷酶基因表达。而且实验证 取50～500ug葡萄糖，分别加0．50mlDNS液，混 实，麸皮是本菌种产B．葡萄糖苷酶较好诱导剂。 匀后沸水浴加热5min，取出冷却，每管加水至5m1，于 540nm波长测定吸光值。以葡萄糖浓度为横坐标，吸光 表2 碳源对菌种产酶影响 Table2 EffectOfdi仟erentcarbOnsOurceOn 值为纵坐标绘制标准曲线。 enzymeyieId 1．2．2．2 B一葡糖糖苷酶活性测定方法 取一定量菌种发酵提取液，加0．50m10．5％水杨苷， 于60℃加热30min，加1．0m1DNS液，沸水浴5min，冷 却水终止反应，540nm波长测定吸光值。酶活单位2-3 不同氮源对产酶影响 u (U)：每分钟每毫升酶液产生lg葡萄糖。 发酵固体培养基中分别加入硫酸氨、氯化氨、豆 1．2．3 豆粕中大豆异黄酮糖苷提取 粉、蛋白胨、尿素。实验结果表明，在所实验的氮 豆粕粉碎，用溶剂热浸提，蒸发浓缩，总提取膏 源浓度范围内，氮源对菌种分泌B一葡萄糖苷酶影响较 状物先用适量热水搅匀，再加一定量石油醚振荡，获 小(表3)。实验说明，用于产酶的麸皮、玉米粉