Protoplastculture原生质体培养.PPT

Chapter 3Protoplast culture Somatic hybridization;Part 1: Protoplast culture （原生质体培养）;Definition of Protoplast; Sub-protoplast (亚原生质体)：incomplete protoplast with or without nucleus Nucleo-plast (核质体)：nuclear protoplast with little cytoplasm (由原生质膜和薄层细胞质包围细胞核形成的小原生质体，即小原生质体) (Miniprotoplast) Micro-protoplast（微原生质体）: protoplast with one or a few chromosomes Cytoplast (胞质体): enucleated protoplast (不含细胞核而仅含部分胞质的原生质体);Cytoplast isolation in Citrus;Progress in PP research;Fact sheet in plant PP research; 原生质体研究的意义;A scheme of plant protoplast manipulation;Protoplast transformation;Protoplast fusion;一、原生质体分离;原生质体分离的材料准备;预处理及酶解;; 酶溶剂及其渗透压 溶剂：原生质体培养基或特殊配制? 渗透压调节剂：葡萄糖、甘露醇、山梨醇等; 材料预处理 在游离原生质体前对供体材料进行预处理及预培养，可提高原生质体的活力和分裂频率 用黑暗处理、低温处理和不同光质照射等方法，可提高原生质体的产量和活力。不同植物及材料类型预处理方法不同 例如，龙胆试管苗的叶片只有用4℃低温处理，甘蔗植株必须先在黑暗条件下培养12 h后分离的原生质体才能分裂。柑橘离体叶片在上午、温室叶片在遮荫、适宜温度（26-30 C）条件下分离效果较好;Enzyme treatment ;Enzyme Incubation ; PP purification;To determine PP Viability ;Factors affecting PP viability;二、原生质体培养;原生质体培养基;常用激素：NAA、IAA、BA与2,4-D ? 常用的渗透压调节剂：甘露醇、山梨醇、蔗糖和葡萄糖等 原生质体渗透压原则：培养基渗透压与细胞渗透压等渗 柑橘原生质体培养不用激素，生长很好！