利用SPEC9孔板方法开发组件实现生物分析的快速方法开发-Agilent.PDF

利用 SPEC 96-孔板方法开发组件实现生物 分析的快速方法开发 应用报告 生物制药 作者 前言 Jennifer Massi 生物样本（如血清，血浆）进行液相分析并串联三重四级杆质谱系统作为检测器时，可 Agilent Technologies, Inc. 以在广泛的浓度范围内获得大量的数据。自动化分析过程和数据管理系统能够提高研究 人员的工作效率，因而样品制备成为生物分析中最主要的限速步骤。虽然蛋白沉淀、样 品稀释和标记都很简单而快速，但仅有这些常规的样品制备方法往往是不够的，特别是 在样品浓度很低的情况下。因此需要建立专属性更强、更为复杂的方法。相比之下，固 相萃取（SPE）是公认的最具选择性的样品制备方法之一。然而 SPE 方法的开发却是一 个具有挑战性而且费时的任务。本文描述了如何使用 SPEC 96-孔板方法开发组件简单而 快速地建立一种新的 SPE 方法。固相萃取浓缩器（SPEC）是一个整体式的盘式提取器， 盘上的萃取小孔（相对于填充床而言），一方面能提高流速另一方面又能减少洗脱体积。 材料和试剂 6. 在低真空状态下（2 英寸汞 ）加载样品到平板上，并且将 甲酸稀释的样品加载到 MP1 和 MP3 相应经 甲酸活化过的孔 色谱纯蒸馏水、甲醇和乙腈；分析纯甲酸、氢氧化铵和醋酸铵以 2 中 及 SPEC 方法开发组件（部件号：A59630 ）。 7. 用 200 µL 的样品稀释液淋洗所有的孔 （包括 MP1 和 MP3 的 样品制备 第 1 个小孔）。MP1 和 MP3 的孔 2 用 200 µL 2%的甲酸缓冲 Agilent SPEC 96-孔板方法开发盘上排列着 8 种吸附剂：C2 ，C8 ， 液淋洗 ， （耐酸）， ， ， （ 和 的混合），以 C18 C18 AR CN PH MP1 C8 SCX 8. 用 200 µL 2%的甲酸缓冲液冲洗 MP1 和 MP3 的孔 1 及 （与 类似，保留极性分子），每种吸附剂有 个小孔。 MP3 MP1 12 9. 用甲酸酸化的甲醇淋洗 MP1 和 MP3 的孔 1 和孔 2 利用含有多种吸附剂的整体式膜盘，用户可以简单、快速地筛选 出最优的固相萃取固定相和洗脱条件，以实现前处理的方法开发。 10. 淋洗完成后 ，所有的孔在高真空 （大于 英寸汞 ）状态下保 10 持 15 秒钟 1. 按表 1 所示配制溶液 11. 如 图 1 所示，在中度真空状态下（2-5 英寸汞 ）用甲醇和 2. 配制样品稀