普微实验之一培养基的制备与无菌检测技术2012版.ppt

微生物学实验的目的及实验室的要求 二、微生物实验室的要求 为了上好微生物学实验课，并保证安全，实验时要注意如下事项： 1、为了保证实验室的整洁和实验的顺利进行，非必要的物品和书包，不得带入室内，实验时不得高声谈话和随意走动 2、每次实验前要对实验内容进行充分预习，了解实验的目的、原理和方法，做到心中有数，并作合理安排。 3、实验中要认真观察，及时做好实验记录。对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验，则需记下每次观察的现象和结果，以便分析。 4、实验操作应严格按操作规程进行，万一遇有带菌物品洒漏、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时，应立即报告指导教师，及时处理，切勿隐瞒。 二、微生物实验室的要求 5、实验过程中，切勿使乙醚、丙酮、酒精等易燃药品接近火源，如遇火险，应先关掉火源，再用湿布或沙土掩盖灭火。必要时用灭火器。 6、凡实验用过的菌种以及带有活菌的各种器皿，应先经高压灭菌后才能洗涤。制片上的活菌标本应先浸泡于3％来苏儿溶液或5％石炭酸溶液中，半小时以后再行洗刷。如系芽孢杆菌或有孢子的菌，则应适当延长浸泡时间。 7、实验中需进行培养的材料，应注明组别、名称及处理方法，实验完毕，应将仪器、用具等洗净，放好，做好桌面及地面的清洁工作。 微生物实验要点 干净利落 胆大心细 实验一 无菌检测技术与常用培养基的制备、灭菌 一、实验目的 1、通过本次实验证明微生物无处不在，并在今后的试验中注意无菌操作。 2、了解配制培养基的一般程序，掌握配制、分装培养基的方法 3、掌握高压蒸汽灭菌的原理及操作技术 （一）环境中微生物的检测 一、目的和要求 1、微生物在自然界广泛存在，在实验室内亦不例外。由于其个体小，人们用肉眼看不到。只有通过微生物的大量繁殖形成微生物群体，即菌落，肉眼才能看到它们。 2、通过本次实验证明实验室内有各种微生物的存在，对微生物有初步的认识，并在今后的微生物学实验中注意无菌操作，防止杂菌污染，保证实验结果的可靠性。 二、实验材料 1、牛肉膏蛋白胨（营养琼脂）培养皿、75%酒精棉球 2、37℃恒温箱、酒精灯、剪刀、火柴、镊子、灭菌棉球、灭菌牙签、记号笔等 三、操作步骤 以4人为一组，取5块灭菌的营养琼脂培养皿，一皿对照不要打开盖，其余每人1皿，每组成员分别选择下列任何一种方法加以处理并在皿上写明班级、姓名、日期及处理方法。 (1)打开培养皿盖，在空气中暴露约10分钟，然后盖上皿盖。 (2)打开培养皿盖，用手指触摸培养基表面2—3个点，注意不要将培养基弄破，然后盖上皿盖。 (3)取自己的头发约5cm长3—5根打开皿盖用镊子放于培养基表面。然后盖上皿盖。 (4)用灭菌牙签取少量牙垢，打开皿盖涂于培养基表面，注意不要将培养基弄破，然后盖上皿盖。 (5)用灭菌棉球在实验台(或凳子)上擦两下，打开皿盖，在培养基表面轻轻涂抹，然后盖上皿盖。注意不要将培养基弄破。 (6)将接种的培养皿倒置放入37℃培养箱培养24-48小时。 四、结果观察 1、同组成员共同观察并记录结果，并与对照皿进行比较。 2、描述你处理的培养皿中长出的菌落，如形状、颜色、大小、边缘等特征 五、思考题 1、本组内不同处理的培养皿上的菌落是否相同，从本实验中得到了什么启示？ 2、在今后的实验操作中要注意的问题是什么？ （二）培养基的制备与灭菌 1、培养基：人工配制、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的混合基质。 2、营养要素：碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水 3、要 求：应具备6大营养要素；物质比例合适；必须灭菌。 一、实验原理 4、培养基的凝固剂： 琼脂：融化温度96℃,凝固温度40-45℃.常用浓度：1.5-2.0% 无营养价值，不易分解，耐压灭菌 明胶：融化温度25℃，凝固温度20℃。 常用浓度：5-12% 作氮源，易分解，不耐压。 5、灭菌：用高压蒸气对培养基进行灭菌时必须根据培养基的种类、容器的大小及数量采用不同的温度及时间。一般少量分装的基础培养基通常为121℃15min灭菌。如盛装培养基的容器较大，则应适当增加其灭菌的温度和时间。含糖培养基，一般采用115℃20—30min灭菌，以免糖类因高热而分解。由于高压蒸气灭菌是通过提高蒸气压力而使其升高温度以杀死微生物，所以加压前应尽量排净锅内的空气。 消毒与灭菌 消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体 灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和 孢子。 方法： 一、物理的方法：加热、过滤、辐射 二、化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物及抗生素等。 培养基的分类 1、物理状态分 （1）固