稳定高表达HSV I糖蛋白B细胞株的建立及表达蛋白的免疫特性毕业论文.doc

稳定高表达HSV I糖蛋白B细胞株的建立及表达蛋白的免疫特性毕业论文目 录中文摘要……………………………………………………………………………1英文摘要……………………………………………………………………………3前言…………………………………………………………………………………6技术路线……………………………………………………………………………11正文…………………………………………………………………………………12第一部分………………………………………………………………………12材料与方法………………………………………………………………12结果………………………………………………………………………19分析与讨论………………………………………………………………23第二部分………………………………………………………………………26材料与方法………………………………………………………………26结果………………………………………………………………………34分析与讨论………………………………………………………………46第三部分………………………………………………………………………50材料与方法………………………………………………………………50结果………………………………………………………………………52分析与讨论………………………………………………………………54小结……………………………………………………………………………56参考文献……………………………………………………………………………57文献综述……………………………………………………………………………64攻读学位期间发表文章情况等……………………………………………………78致谢………………………………………………………………………………79南京医科大学硕士学位论文 PAGE \* MERGEFORMAT 74前 言单纯疱疹病毒 (Herpes simplex virus，HSV) 是人类病毒感染性疾病中最常见的病原体之一。HSV为有包膜的DNA 病毒，属疱疹病毒科α亚科，由外膜、核衣壳、皮质层和核酸组成。外膜为双层类脂质，膜上有糖蛋白短突起。内有核心，核心由核衣壳蛋白包裹，为20面体，有162壳粒。病毒体直径为120～150nm[1]。其基因组为一线性双链DNA分子，由共价连接的长片段 (L) 和短片段 (S) 组成，两者分别占病毒DNA的 82 % 和18 % ，每一片段由中间的独特序列 (U) 和两端的倒置重复序列组成，根据L和S片段相互连接方式的不同可有4 种同分异构体[2-4]。HSV有二个血清型，即HSV I型和HSV II型，迄今为止已测定了HSV I和HSV II基因组的全部序列，序列分析显示二者在核苷酸序列、框架结构、编码蛋白质功能上存在较大同源性，型间有共同抗原，也有特异性抗原。HSV I感染主要引起口唇部疱疹、疱疹性眼角膜炎、疱疹性脑炎等疾病。HSV II感染主要引起疱疹性阴道炎、新生儿疱疹性脑炎、生殖器疱疹，并且与女性宫颈癌的发生密切相关，也是HIV性传播的重要协同辅助因素之一[5]。同时，HSV I引起的生殖性疱疹也日益增多。在免疫正常者中HSV感染很少导致严重疾病，但在免疫缺陷者中却可导致严重疾病或并发症，在孕妇中可引起宫内感染和新生儿疱疹而严重影响优生优育。母体在感染HSV II后可通过产道或密切接触， 垂直传染子代新生儿引起疱疹病毒脑炎，死亡率高达100%[6]。HSV先在感染的组织或接近部位繁殖，构成原发性感染灶，原发感染产生免疫力后，将大部分病毒清除，部分病毒可沿神经髓鞘到达三叉神经节（HSV I）和脊神经节（HSV II）细胞中或周围星形神经胶质细胞内，以潜伏状态持续存在，与机体处于相对平衡，不引起临床症状，即潜伏感染。当受到外界刺激如物理、情感压力、发热、紫外线照射、组织损伤或免疫抑制等，潜伏的病毒激活增殖，沿神经纤维索下行至感觉神经末梢，至附近表皮细胞内继续增殖，引起复发感染[7-9]。其特点是每次复发病变往往发生于同一部位。最常见在唇鼻间皮肤与粘膜交界处出现成群的小疱疹。疱疹性角膜炎、疱疹性宫颈炎等亦可反复发作[10]。HSV的感染在全世界都非常普遍。HSV I是世界上流行最广的病毒性感染之一，?成年人血清中阳性率高达85%以上，某些国家和地区甚至达到100%；HSV II是目前世界上发生最广的性传播疾病，据估计全世界有20%人为HSV II阳性，并且发病人数以约25%的比例逐年增加[11-13]。一项数据显示，近年来我国的HSV I感染显著增多，约占HSV感染总人数的10%~40%。HSV II的感染率在患有性病、生殖道感染的妇女中约72.9%，在正常妇女中约25.6%。在美国总人口中，近10年HSV II血清流行