籼型杂交中稻盐两优2208分子标记纯度鉴定技术规程的研究毕业论文.doc

籼型杂交中稻盐两优2208分子标记纯度鉴定技术规程的研究毕业论文 目 录 摘 要 I Abstract III 第一章 绪论 1 1.1 水稻育种概况 1 1.2 杂交水稻品种和纯度鉴定概况 1 1.2.1杂交水稻纯度鉴定的研究进展 1 1.3 杂交水稻纯度鉴定的类型 2 1.3.1常规鉴定法 3 1.3.2 DNA指纹图谱研究进展 4 1.4 分子标记在水稻纯度鉴定的应用前景 9 1.4.1 品种保护和新品种鉴定中的应用 9 1.4.2 品种真实性及纯度鉴定的应用 9 1.4.3 分子标记在作物纯度鉴定中的问题与应用前景 10 1.5 本研究目的 10 第二章 材料与方法 13 2.1 供试材料 13 2.1.1 水稻材料 13 2.1.2 主要仪器和试剂 13 2.1.3 主要缓冲液及试剂的配制 13 2.1.4 SSR引物来源 14 2.2 方法 14 2.2.1 田间纯度调查 14 2.2.2 水稻总DNA提取 15 2.2.3 SSR分子标记的PCR反应体系的优化 15 2.2.4 PCR扩增产物电泳检测 16 2.2.5 SSR引物的筛选 17 2.2.6 SSR指纹图谱谱带分析 18 2.2.7 统计分析方法 18 2.2.8 纯度计算方法 18 2.2.9 田间杂株类型的分析 18 第三章 结果与分析 19 3.1 盐两优2208田间杂株鉴定 19 3.2 两种方法提取模板DNA及对应模板的PCR检测 19 3.3 SSR反应体系的优化 21 3.4 盐两优2208杂交种种子纯度检测 22 3.4.1 盐两优2208多态性引物的筛选 22 3.4.2 杂交水稻盐两优2208品种种子纯度的鉴定 24 3.4.3 杂株类型统计分析 28 第四章 讨论 30 4.1 纯度鉴定PCR模板的提取及影响PCR阳性率因素 30 4.2 鉴定结果的差异性探讨 30 4.3 样本植株的大小和发芽率对纯度鉴定的影响 31 4.4 SSR标记鉴定的最小样品量 31 参考文献 33 附录 37 致 谢 39  第一章 绪论 1.1 水稻育种概况 水稻属于禾本科植物，是世界上最重要的一种粮食作物，占世界粮食作物总产量的40％。中国作为最大的稻米生产、消费国，我国有60%以上人口的主食为稻米，2012年中国稻谷播种面积为3050万公顷，占粮食作物总播种面积的27％左右。占世界稻谷播种面积的19％，水稻总产量达l745亿t，约占世界粮食总产量的38％。在我国耕地面积逐年减少的情况下，水稻作物在我国粮食生产上发挥了巨大的作用，其中杂交水稻种子的纯度与农民的收入密切相关[1]。 我国水稻史上发生过三次大的技术性革命：第一次是发生在20世纪50年代的“矮化育种”[2]；第二次是发生在2O世纪70年代的“杂种优势”[3]；第三次是“两系”选育。这三次技术革命使水稻在增产增收方面起了重要作用。我国是世界上第一个利用水稻“杂种优势”用于生产的国家，也是世界上最大杂交水稻生产国与消费国，杂交水稻面积约占水稻总面积的58%，杂交水稻种子每年使用量约2.5亿kg。但随着社会在不断进步，人口持续增长、耕地面积锐减、环境严重污染等恶劣环境，给水稻增产带来了空前的压力。种子质量关系到广大农民的切身利益[4]，甚至影响到了社会的安定和谐，因此在提高水稻种子的质量方面显得尤为重要。利用生物技术缩短水稻育种进程，提高水稻产量[5]是育种和生物科技工作者的共同使命。 1.2 杂交水稻品种和纯度鉴定概况 1.2.1杂交水稻纯度鉴定的研究进展 中国是世界上第一个成功的研究和广泛生产杂交水稻的的国家，从1964开始杂交水稻育种研究工作，于1973年实现了“三系”配套．1974年推出了“强优势组合”[6]，于1975年研制出了一整杂交套制种技术，在1976，杂交稻广泛投入生产(闵邵楷，1983)，杂交水稻生产面积为1333万m2，占水稻总面积的60%（旦千秋，2000）。随着杂交水稻育种面积的不断增加，农民对杂交种需求量也在不断的增加，生产上遇到的难题就是种子纯度问题。种子纯度被作为评价杂交水稻种子质量的核心指标，也是被用作种子分级鉴定的主要标准，是企业作为购销种子的关键性依据，受到种子公司、农民、种子管理部门的密切关注。据规定的杂交水稻种子纯度以96％为最低限度，低于96%的则视为为不合格种子，禁止销售。种子纯度下降将会导致作物产量和质量随之明显降低，而纯度低的杂交水稻种子会给农民带来伤害。据统计，杂交稻种子的纯度下降1％，稻谷每亩会减产4—5 kg[7]，而纯度下降10％，杂交稻便无法增产。因此，建立一套快速、可靠、经济[7]的纯度检测技术，是促进中国种子产业参与国际竞争和规范种子市场的迫切需要。 目前鉴定杂交水稻种子的纯度通常所采用的方法是进行异地田间社区种植鉴定[