大鼠MSCs分离培养及其形态观察.pdf

第24 卷第5 期 西 安 交 通 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) V ol. 24 N o. 5 2 0 0 3 年 1 0 月 J ournal of Xian J iaot ong U niversit y ( Medical Sciences) Oct . 2003 ◇技术方法 ◇ 大鼠骨髓间充质干细胞分离培养及其形态观察 1 1 2 1 1 康新勤 ,臧伟进 ,宋土生 ,于晓江 , 曾菊绒 (西安交通大学医学院 :1. 心血管生理药理研究室 ; 2. 生物学教研室 ,陕西西安 　710061) 摘要 : 目的 　分离和培养大鼠骨髓组织中的间充质干细胞 ,并观察其生长形态。方法 　利用造血干细胞和骨髓间充 ( ) 质干细胞不同生长特性 ,采用贴壁法分离并用含 15 % 体积分数 FBS 的低糖型 DMEM 培养基培养。结果 　分离培 养得到的细胞中随着换液次数的增加红细胞和造血细胞逐渐减少 ;骨髓组织中贴壁得到间充质干细胞呈梭形、纺锤 形和多角形。结论 　贴壁法可以分离培养骨髓中的间充质干细胞。 关键词 :骨髓间充质干细胞 ;分离 ;培养 ( ) 中图分类号:R329. 2 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 2003 　　1999 年《Science》杂志将干细胞研究列为当年十大科学研 2 　结 　　果 究之首。干细胞研究已成为生命科学的一个主攻热点。骨髓 中至少包含两种干细胞成分 ———骨髓间充质干细胞和骨髓造 接种骨髓的培养板 24 h 后镜下观察发现细胞浓度极大 , 血干细胞。现在的研究揭示骨髓间充质干细胞有分化成多种 全为球形的大鼠骨髓中的血红细胞 ,如堆积的沙粒状 ,悬浮于 细胞的潜能1 ,包括心肌细胞2 、肝细胞3 、脑中的神经细胞 培养液中并有少量血红细胞相互聚集发生 ;连续 3 d 换液后 和非神经细胞4 、内皮细胞、成骨细胞和肺泡上皮细胞5 等。 观察发现悬浮于培养液中的红细胞大量减少 ,塑料培养孔底 研究骨髓细胞的分化潜能 ,首先要分离骨髓中的间充质干细 部有少量的贴壁细胞 ,呈梭形、纺锤形和多角形 ;培养 7 d 后 胞。本文根据骨髓中造血细胞和间充质干细胞的不同生长方 培养液中悬浮的细胞已完全除去 ,只留下贴壁的细胞 ,并且贴 式 ,采用一种较简单的分离方法 ,并观察了大鼠骨髓间充质干 壁细胞数量明显增加。对比每个培养孔不同区域细胞分布发 细胞的生长形态。 现 ,培养孔边沿部分细胞密集 ,形态有梭形、纺锤形和多角形 ( 图 1) 。相对中央部分 ,位于培养孔边沿的细胞长势好而且 1 　材料和方法 细胞体积大 ,即出现“细胞边集现象”。培养 14 d 观察发现 ,