环境微生物实验课教学大纲.doc

《》教学大纲课程名称学　　时： 先修课程：环境微生物学、生物化学等 一、课程目的和任务1．使学生掌握研究与应用环境微生物的主要方法与技术，包括经典的、常规的、以及现代的方法与技术，使学生具有适应于从事环境工程学科的基础理论研究与污染物的生物处理方法中微生物学实验技能。 2．与环境微生物学基础理论课紧密结合，使学生将理性知识与感性认识有机地结合，将书本知识用于实验，在实验中更深地理解基础理论，在实践中掌握熟练的操作技能，提高学生的综合能力。 3．提高学生分析问题和解决问题的能力。根据本学科的特点，逐步使学生认识微生物的基本特性，知道如何研究环境中的微生物以及对研究中所出现的问题加以分析和解决。 二、基本要求1．观察和掌握微生物的显微特征和培养特征； 2．学习和掌握微生物显微观察技术、无菌操作技术、分离纯化技术、纯培养技术及基本的监测检测技术等基本技术； 3．通过综合性、设计性实验，培养学生分析问题、解决问题和创新精神以及团队合作的精神和创新意识。 三、内容将酿酒酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓，可不必稀释。 镜检记数室在加样前，先对记数板的记数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行记数。 加样品将清洁干燥的血球记数板盖上盖波片，再用无菌的细口滴管将稀释的酿酒酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进行计数室，一般进行计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。 显微镜计数静止五分钟后，将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数。一般样品稀释度要求每小格内约有5-10个菌体为宜。每个计数室选5个中格（可选4个角和中央的中格）中的菌体进行计数。位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数室中计得的值来计算样品的含菌量。 清洗血球计数板 使用完毕后，将血球计数板在水龙头上用水柱冲洗，洗完后晾干。镜检，观察每小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。 五、实验报告和思考题 1.结果将结果记于下表。A表示中方格中的总菌数；B表示菌液稀释倍数。 A B 菌数/ml 二室平均值 1 2 3 4 5 第一室 第二室 2.思考题根据你实验的体会，说明用血球计数板的误差主要来自那些方面？应如何尽量减少误差，力求准确？ 实验三 培养基的制备和灭菌（4学时） 一、目的 学会一般培养基的制备原理、方法、掌握培养基及器皿的灭菌方法 二、原理 培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物配置而成的基质。其中除含有水份、碳水化合物、含氮化合物和无机盐外，有的还需要维生素。以提供微生物新陈代谢所需要的能源、碳源、N源和其它化合物，由于不同微生物对营养物质的要求不同，因此，需提供不同种类的培养基。一般培养基细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基，培养放线菌常用淀粉培养基，培养霉菌常用马铃薯培养基，培养酵母菌常用麦芽汁培养基。 培养基除了要满足微生物所要求的各种营养条件外，还应保证微生物所需要的其它生活条件，如适宜的酸碱度，渗透压等，因此，对不同种类的微生物，应将培养基调节到一定的pH范围，如细菌、放线菌培养基为中性；霉菌、酵母菌培养基为弱酸性。 根据研究目的的不同，可以将培养基制成固体，半固体和液体三种形式。固体培养基的成分与液体相同仅在液体培养基中加入凝固剂作支持物。通常加入1.5～2.0的琼脂，半固体加入0.3～0.5的琼脂作支持物，有时也可用明胶或硅胶。 三、材料与用具 材料：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、NaCl；1mol/L NaOH,，1mol/L HCL 用具：试管、锥形瓶、漏斗、量筒、移液管、烧杯、纱布、棉花、玻璃棒、 pH试纸、漏斗架、止水夹、台秤、硫酸纸、药匙、防潮纸、线绳、标签纸、剪刀、解剖刀、镊子、白瓷盘、铁丝筐。 四、方法 培养基的制作方法 称量：按照培养基的配方，准确称取各成分于烧杯中。 溶化：向上述烧杯中加入所需要的水量，搅动，然后加热使其溶解。 调节pH值：用0.1N NaOH或1N HCl调至合适的范围。 过滤：用滤纸或双层纱布（中间夹一层脱脂棉花）趁热过滤。 分装：根据不同的需要，可将制好的培养基分装入试管后三角瓶内，管（瓶） 口塞上塞子。 （1）液体：分装高度以试管高度的四分之一左右为宜； （2）固体：分装试管，每管为管高的五分之一，灭菌后制成斜面，分装三角瓶的容量以不超过三角瓶的一半为宜。 （3）半固体：分装试管一般以管高的三分之一为宜。灭菌后垂直待凝成半固体深层琼脂。 塞：培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉花，以阻止