过敏原提取11-04-08课件.ppt

Name: guanlu;;方案二后续步骤;先对方案二处理的样品单独进行了透析，可能是用水脱色的原因或者操作过程中的一些失误，电泳后的胶中没有条带，只有一条鬼峰（图如下）。当时猜想是不是透析袋孔径与要保留的蛋白分子量接近，而造成了这些蛋白都被透析出了透析袋，进入了透析液中。 ;方案一后续步骤;所得胶的图如下，图中的小孔是我制胶时有气泡而造成的，第一列是marker，后面三列的条带分别是方案二中处理的样品和方案一中处理的样品（点了最后两个孔，分别是我加丙酮后进行了混匀操作和没有混匀操作的）。 ;考马斯亮蓝法测蛋白含量——标曲;考马斯亮蓝法测蛋白含量的操作比较繁琐，影响因素比较多，测了很多次后，才有了相对较好的线性（R2值在0.99以上）。 本想用紫外法在280nm直接测出蛋白含量，但由于紫外分光光度计坏了，也没有石英比色皿，因此只能用考马斯亮蓝法测定。考马斯亮蓝法所测蛋白浓度很低，范围又比较窄，一般透析后原液的蛋白含量都超出其线性范围，所以只能将样品蛋白稀释后再进行测定。 该法所测方案二处理的样品中蛋白浓度为0.824mg/mL，方案一处理的样品中蛋白浓度为1.26mg/mL（加丙酮后混匀）和0.283mg/mL（加丙酮后未混匀）。;河虾过敏原的提取;;根据电泳所的条带进行分析，选定方法（除杂蛋白较彻底的方法）后，进行过柱分离与纯化，希望将酪蛋白、 α-乳白蛋白和β-乳球蛋白都分离开。 对河虾蛋白浸液进行硫酸铵分级沉淀和等电点沉淀以分离出河虾过敏原，在对其进行透析等步骤。 比较文献报道的鱼中过敏原，确定所用鱼的种类以及所用提取方法，初步尝试提取鱼中过敏原。