大规模RNAi筛选技术的时代已经来临-生命奥秘.PDF

生生命命奥奥秘秘wwwwww..lliiffeeoommiiccss..ccoomm 热点话题 大规模RNA干扰筛选技术 （large-scale RNA interference (RNAi) screens ）终于给科学家带来了回报：为探 索多种生物学问题，研究人员通过在哺乳动物细胞内进行大规模的RNAi筛选获得了一些线索。下文将对这项 领先技术进行介绍。 近，在高等哺乳动物细胞内展开的大规模RNA i筛选 （large-scale RNA interference 最(RNAi) screens ）工作在学术界引起了广泛的关注。 美国布罗德研究所 （Broad Institute ）RNAi协会主任David Root指出，研究人员直到近期才首次开展了 几次大规模筛选工作。尽管大家可能对大规模RNAi筛选技术还存在争议，但无法否认的事实是，这项技术的 确非常有用。 大规模 RNAi筛选 技术 的时代已经来临 你只需在PubMed上进行一个快速有哪些信誉好的足球投注网站便可 词典1）与siRNA 的数据资料越来越多，系统的、混 以发现，在过去短短的1年内，大规模RNA i筛选 合的筛选方法也在不断涌现，所以有越来越多的研 技术已经得到了广泛应用。例如，将其应用于研 究哺乳动物细胞的科学家开始转向选择使用大规模 究体外培 [ 1] 养人体细胞的分裂过程 、应用于鉴定 的RNAi筛选技术。但很快，研究人员发现，进行如 [2] HIV病毒感染需要哪些宿主因子 、应用于寻找哪 此复杂的整体分析，如何进行优化以及试验数据验 [3,4] 些基因对于人类细胞是必需的 以及应用于找出 证从而得出一个有意义的结果，仍然是一个严峻的 与5q综合症5 （5q-syndrome ）致病相关的基因[5] 问题。Root说道： “通常来说，你越是想从这种细 等方面。 胞水平的筛选中获得重要结果，你就越难得到你想 现在可供研究人员使用的shRNA （见文后小 要的结果。” 3434 使用siRNA获得想要的结果 德国德累斯顿Max Planck分子细胞生物研究院的研究人员Frank Buchholz说道： “起初，在我们还没有获得想要的结果的时候，出现 了各种各样的对大规模RNAi筛选技术质疑的声音。”当发现人工合成 的siRNA就足以诱发哺乳动物细胞的基因沉默，而不须像以前要使用 dsRNA进行干扰来沉默基因时，人们的兴趣被点燃了。 但当研究人员兴致盎然地开始分析 “脱靶” （偏离最初预想的） 的实验结果时，他们发现，所谓的RNAi可以快速诱导基因表达沉默的 神话破灭了。 随着对 “脱靶”情况分析的逐步深入，人们发展出了一些新的解 决办法。最近，在si