带你走进多重蛋白分析的世界一二三.PDF

带你走进多重蛋白分析的世界 (一)(二)(三) 在分析蛋白时，我们有两个经典选择：Western blot 和ELISA。这两个实验不肖多说，大家都做过。 它们依靠特异抗体的免疫识别，每次报告一个抗原的存在或相对丰度。但有些时候，您可能想了解多个 蛋白的水平。比如临床实验室收到一份病人的血液样本，需要评估一下各种生长因子和细胞因子的水平。 怎么办？开展多个Western 或ELISA 实验？耗时费钱不说，样本还不一定有这么多。 那么，欢迎进入多重蛋白分析的世界。与单重 Clontech 的Antibody Microarray 500 包含一 分析不同，多重分析能让研究人员同时分析多个目 套两块相同的芯片。每块芯片由 507 个不同、信 标，从几个到几百个。多重分析有两种主要形式： 息明确的单克隆抗体组成。这些单克隆抗体被固定 抗体芯片和基于微球的液相芯片。 于标准大小 (75 x 25 x 1 mm) 的玻璃基片上，可 以检测较宽范围的细胞内蛋白质，包括细胞质蛋白 与单重分析相比，多重分析拥有一些独特优 质和膜结合蛋白质。这些蛋白质功能广泛，涉及细 势。最明显的是，研究人员能够从少量的样本中获 胞凋亡、癌症、细胞周期调控、基因转录和神经系 得更多的信息。同时，多重分析也更快，易于自动 统学等。 化，且更节约试剂。在一般的 ELISA 实验中，每 孔需要 100-200 μl 样本。而据 Bio-Rad 公司负责 在样品处理时，需要用 Cy3 和 Cy5 对样品进 Bio-plex 产品线的经理介绍，Bio-Rad 的 Bio-Plex 行标记。这种双色检测方法可避免染料标记的固有 分析只需要 12.5 μl 或更少（每个反应）。 差异影响实验结果。从蛋白提取到芯片扫描的整个 过程可在一天内完成，无需特殊的技术培训。此芯 抗体芯片 片适用于大部分商业化的芯片扫描仪。 抗体芯片是蛋白质芯片的一种，它依赖于抗体 Sigma-Aldrich的Panorama® Antibody Array 作为亲合体固定在固相载体的表面，通过特异性的 - XPRESS Profiler725 包含了 725 个不同的抗体， 免疫反应捕获待测样品中的抗原，从而实现高通量 每个重复两次点在硝酸纤维素包被的载玻片上。这 的免疫检测。抗体芯片可以在一次实验中比较生物 包括 些抗体代表了参与多个重要通路的蛋白家族， 样品中数百个蛋白的相对丰度，从而分析样品之间 细胞信号、基因调控和MAPK/PKC。此芯片能在 的差异，确定蛋白表达水平的变化。 半天内带来准确可靠的蛋白表达谱。除了XPRESS 抗体芯片的固相载体有：微孔、塑料、多孔胶 Profiler725 之外，Sigma还提供了细胞信号、基因 片、渗透滤膜（如硝酸纤维素膜）以及包被了不同 调控、MAPK PKC通路以及p53 通路相关的抗体