微流控芯片NDA在线衍生测定单细胞中谷胱甘肽.PDF

V o l. 26 高 等 学 校 化 学 学 报 　 N o. 2　 2 0 0 5 年 2 月 　　 　　　　　CH EM ICAL JOU RNAL O F CH IN E SE UN IV ER S IT IE S　　　　　 　　 247～ 249　 [ 研究简报] 微流控芯片 NDA 在线衍生测定单细胞中谷胱甘肽 凌云扬, 殷学锋, 方肇伦 (浙江大学化学系微分析系统研究所, 杭州 3 10027) 关键词　微流控芯片; 单细胞; 在线衍生; 谷胱甘肽 中图分类号　 657　　　　文献标识码　 　　　　文章编号　025 10790 (2005) O A [ 1 ] 单细胞分析对研究细胞内信号传递和重大疾病的早期诊断等具有重要意义 . 荧光标记是检测细 [2 ] [ 1, 3 ] 胞内物质的常用技术 . 为防止衍生时的过度稀释, 大多采用柱前细胞内衍生法 , 衍生后再用微流 控芯片分析. 此法操作复杂, 需多次离心分离, 且能透过细胞膜标记胞内组分的荧光试剂较少. 测定红细胞中的谷胱甘肽(GSH ) 在生物学和临床医学上具有重要意义[4, 5 ]. 我们在前文[3, 6 ] 的研究 基础上, 通过将衍生剂 2, 3萘二甲醛( ) 加入电泳缓冲液中, 在线标记了单细胞的 , 实现了在 N DA GSH ( ) 微流控芯片上分析单个细胞内容物全过程 进样、贴壁、静态溶膜、衍生、分离和测定 的集成化. 结果 表明, 在线衍生单细胞操作简单, 能节省细胞的处理时间和试剂, 可用于衍生速度较快的反应. 1　实验部分 [ 6 ] ( ) 1. 1　仪器与试剂　参照前文 方法 自制微流控芯片 图 1 , 通道深 12 m. 自制四路高压直流电源和 共聚焦激光诱导荧光( ) 检测器用于细胞观 L IF 察、操纵和检测. 激光器激发波长 473 nm , 荧 光发射波长 528 nm. 参照文献[ 3 ] 方法制备 GSH 标准溶液、2 乙腈溶液和生理盐水( ). 在 m g mL N DA PP S 线衍生电泳缓冲液的组成为 1 20 mL mm o l L 硼砂