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外周血标本检测EGFR基因突变的操作体会.pdf
诊断病理学杂志2016年6月第23卷第6期 ·471·
doi：10．3969／j．issn．1007—8096．2016．06．022
外周血标本检测EGFR基因突变的操作体会
王也，笪冀平 (中日友好医院病理科，北京100029)
ARMS法
[关键词]外周血；EGFR基因突变；
[中图分类号]R446[文献标识码]B[文章编号]1007—8096(2016)06一0471—03
本文旨在介绍外周血样品应用扩增阻滞突变系统 8连排反应条盖上盖子，离心后放人实时定量PcR仪中。每
轮反应设置阴阳对照各一。扩增程序：95℃5min；95℃
(ARMs法)检测EGFR基因突变的操作流程，以及在实际操
25
作中可能遇到的问题，并对外周血检测EGFR基因的应用和 s，64℃20s，72℃20s，15个循环；93℃25s，60℃35s，
72℃20
优缺点进行总结。 s，31个循环，在60℃时收集FAMyVIC荧光信号。
1．3结果判定阴性对照无信号，阳性对照ct值20。待
1材料与方法
测样品内控、外控信号应升起，外控信号应在13～19。满足
1．1材料
上述条件的试验结果为可信结果。突变ct值≥阴性临界值
1．1．1标本收集中日友好医院2015—08一11间送检的
时为(一)，阳性临界值为强(+)。当突变ct值≥阳性临
10例外周血样品，其中男性8例，女性2例，年龄45—77岁，
界值且阴性临界值时，计算△ct值(△ct值=突变ct值
平均年龄60．5岁。每例样品采血10“，EDTA抗凝。
一外控ct值)。若△ct值相应的△ctCut—off值，则该样
1．1．2试剂一次性使用真空采血管(游离DNA保护专
品为弱(+)；若△ct值相应的△ctcut—off值，则该样品为
用)、血清／血浆游离DNA分离试剂盒(离心柱型)、人类
(一)。
EGFR基因突变检测试剂盒(厦门艾德生物科技股份有限公
司)；无水乙醇(北京益利精细化学品有限公司)；RNase-free
2结果
water(QIAGEN)。 2．1 血浆DNA质量控制用超微量紫外分光光度仪测定
1．1．3仪器sIGMA3—18K型台式高速离心机；其林贝尔 DNA样品的浓度，平均浓度为10．387
n∥斗l，平均0D260／
GL-150B干式恒温器和QL-901涡振荡器；珠海黑马Min
0D280比值为2．087。
1424
8连排迷你离心机；岛津Biospec—nano超微量紫外分光
2．2 EGFR基因突变检测样品的外控信号平均值为
光度仪；ABI7500实时定量PcR仪。
1．2方法
1．2．1标本采集常规采血10ml，用一次性真空采血管
值，△ct值为8．116，其相应的△ctcut—off值，说明该样品
(游离DNA保护专用)接采血针收集血
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