LCMS检测西他沙星原料中基因毒性杂质的含量.pdf

LC-MS 检测西他沙星原料中基因毒性杂质的含量 1 3 2 2* 石莹 宋雪洁 李浩冬 路显锋 1 药物研究院分析所，扬子江药业集团，泰州225321 2 药物制剂新技术国家重点实验室，扬子江药业集团，泰州225321 3 质量管理部，扬子江药业集团，泰州225321 摘要 建立了LC-MS 法测定西他沙星中基因毒性杂质对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯含量的方法。方法: Agilent Poroshell 120 EC-C18 0.1% : V/V =60:40 采用 色谱柱；流动相为纯水（ 甲酸）甲醇（ ） ；稀释剂为乙腈 0.1% : V/V =50:10 40 5 l 0.4ml/min （ 甲酸）纯水（ ） ；柱温为 ℃；进样体 为 ；流速为 ；采用正离子模式进行 扫描。对甲苯磺酸甲酯测定浓度在0.76ng/ml~15.27ng/ml 范围内，线性关系良好；对甲苯磺酸乙酯测定浓度 在0.75ng/ml~15.0 1ng/ml 范围内，线性关系良好。对甲苯磺酸甲酯的定量限为0.0038ng；对甲苯磺酸乙酯的 0.0038ng 80% 100% 160% 90~ 110% 定量限为 。杂质回收率在限度浓度 、 和 三个浓度 水平均在 之间，该方法准 确度良好。该方法适用于西他沙星原料中对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯的检测。 西他沙星(sitafloxacin)是日本第一制药有限公司继左氧氟沙星后开发出 的一种强力广谱新氟喹诺酮类抗菌剂，该药对革兰氏阳性球菌，革兰氏阴性菌以 及厌氧菌的抗菌活性是左氧氟沙星的4～32 倍，同时对肺炎球菌DNA 促旋酶和 拓扑同功酶有双重抑制作用。临床表现有极广的抗菌谱，特 是对呼吸道的病菌 有极强的抗菌活性。 因西他沙星的一个起始物料为对甲苯磺酸盐，在后续反应中对甲苯磺酸若有 残留，可能会与溶剂甲醇、乙醇反应生成具有基因毒性的杂质—对甲苯磺酸甲酯 和对甲苯磺酸乙酯，故采用LC-MS 法对产品中的对甲苯磺酸甲酯/ 乙酯进行控制。 1、实验部分 1.1 仪器与试药 Agilent 1200 液相色谱仪(美国安捷伦公司) ；Agilent 6460 三重串联四极杆质 谱仪(美国安捷伦公司) ；XP205 型电子天平(瑞士梅特勒托利多公司) 。 西他沙星（批13011301），扬子江药业集团江苏海 慈生物药业有限公司生产；对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯，国药化试集团生 产；甲醇为色谱纯，水为本公司自制超纯水，其他试剂均为分析纯。 1.2 方法与溶液配制 1.2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent Poroshell 120 EC-C 18 50mm×3.0mm×2.7μm ；流动相：纯水（0.1% 甲酸）：甲醇（V/V ）=60：40 ；稀释剂：乙腈（0.1% 甲酸）：纯水（V/V ）=50： 10；柱温：40 ℃；进样体 ：5 l ；流速： 0.4ml/min ；运行时间：8min ； 1.2.2 质谱条件 采用电喷雾离子源 （ESI），正离子模式采集，干燥气温度300 ℃，干燥气流速5 L/min ，喷嘴电压：500V，雾化气压力：45psi ，鞘气温度：250 ℃，鞘气流速： 11 L/min ，毛细管电压：4000V ，采用MRM 多反应监测方式，分时间段检测对 甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯。 表1.1 MRM 采集参数设置 分辨 驻留 锥孔电压 碰撞能 时间段 监测化合物 母离子 分辨率 子离子