实验3 吸收放散试验、效价.ppt

吸收放散试验与血型抗体 效价测定（IgM） 临检教研室 目的 掌握红细胞抗体吸收放散试验的原理、方法 原理 1.吸收试验：间接证明红细胞上的血型抗原及其强度，常用于ABO亚型鉴定。受检细胞加入已知效价的抗-A及抗-B血清后，若红细胞上有相应的抗原，便吸收血清中的抗体。再以已知抗原红细胞来滴定，比较吸收前后抗体的效价，证明受检红细胞上有无相应抗原及其强度。 2.放散试验：红细胞上的抗原与抗体在适合条件下发生凝集或致敏。可逆结合，如果改变某些物理条件，抗体可从细胞上放散出来，再以相应红细胞鉴定放散液内抗体的种类，测定其强度，判定原来红细胞上抗原的型别。 吸收放散试验 （一个班四组，四管吸收液） 待 检 红 细 胞 已知 效价 的抗 A和 抗B 血清 吸收液 已知抗原 的红细胞 滴定 比较吸收 前后血清中 抗体效价 红细胞上 有无相应 抗原及其强度 间接判定待检 红细胞血型 及其亚型种类 吸收试验 放散试验 器材:小试管、滴管、试管架、记号笔、冰箱、离心机、56℃水浴箱 试剂: 1．抗-A及抗-B分型血清 2．3%-5%A型及B型试剂红细胞 3．生理盐水 标本: 静脉血 操 作(已做好) 1. 冷吸收：受检红细胞洗涤3次，末次洗涤除尽盐水，取1份压积红细胞加3份人源抗-A/抗-B分型血清混合，置4℃ 30-60min，每隔10min将试管振摇1次，充分冷吸收 (最好4℃过夜)。（最好加做一个Ｏ细胞－－－阴性对照） 2.洗涤：离心去除上清液，以4℃冷盐水洗涤红细胞3次，留取压积红细胞。 操 作 3.放散：加等容积生理盐水，置56℃水浴中10min（前1min用手振摇后，56℃环境静置9min）。立刻1000g离心3min（离心时套管内放温水，温度保持56℃），离心后立即将上清液（放散液）转移到另一干净试管中。 4.检测：放散液均分两管，用A型和B型试剂红细胞鉴定抗体，即可检出受检红细胞血型。 1、放散液和A型红细胞凝集与B型红细胞不凝集被检血型为A型，反之为B型； 2、放散液和A型与B型红细胞均凝集，被检血型为AB； 3、如均不凝集为O型。 结果判定 1.吸收血清为人源强； 2.洗涤红细胞时盐水尽可能去尽。 3.吸收温度4℃（冷吸收，对ABO系统IgM类抗体），37℃（热吸收，对Rh系统等IgG类抗体）； 4.吸出尽可能多的放散液，离心去除吸收细胞。 5.放散时注意温度、时间。 6.放散液中的Ab易变性，立即用于定血型（新生儿溶血病、亚型） 注 意 事 项 血型抗体效价测（IgM） （两个同学一组，抽一管血） 实验目的：掌握抗体效价的测定方法。 实验原理：Ab经过倍比稀释加入悬浮红细胞，以肉眼可见“+”凝集的最高稀释倍数为抗体效价。 器材：小试管、记号笔、滴管、离心机。 试剂：悬浮红细胞、生理盐水。 标本：血清。 实验步骤 1.标记：1、2、4、8、16、32。 2.加样：从2号开始各管分别加生理盐水0.05ml； 1、2管各加血清加血清0.05ml。3.倍比稀释：将2号管混匀，从中吸出0.05ml移入第3管，混匀；再从第3管吸出0.05ml移入第4管，以此类推，至最后一管，吸出0.05ml弃去。 4.加悬红：每管各加0.05ml，混匀。 5.观察结果：3000r／min离心15秒，直接观察结果。　 凝集强度判断标准 4+ 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。 3+ 红细胞凝集成一大块，数小块，血清尚清晰。 2+ 红细胞凝块分散成许多小块，血清尚清晰。 l+ 肉眼可见小颗粒，周围有较多游离红细胞，血清混浊 ± 轻摇时细胞非呈现细沙状流下，有缺口。镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。 mf 混合凝集外观（mixed field）指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。 － 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布，呈现细沙状流下。 注 意 事 项 1.更换滴管，防止干扰。 2.防止前带现象，看结果从高稀释度开始 3.试剂细胞。 4.稀释液体积越小，产生误差越大。 作 业 IgG抗体效价如何进行检测？ * *