灭活剂，保护剂和免疫佐剂.ppt

第三章 灭活剂、保护剂和免疫佐剂 第一节 灭活剂 一、灭活与灭活剂 1、灭活概念 是指破坏微生物的生物学活性、繁殖能力和致病性，但尽可能不影响其免疫原性，被灭活的微生物主要用于生产灭活疫苗；或指破坏 诊断血清或待检血清中的补体活性，以避免补体对诊断试验的干扰作用。 微生物毒力的灭活或毒素毒性灭活或补体活性灭活 2、灭活方法 物理方法（不用） 化学方法（常用） 3、灭活剂：用于灭活微生物的化学试剂或药物称为灭活剂;二、常用灭活剂的灭活机理与应用 (一) 灭活剂种类 1、甲醛溶液： ①蛋白质 ②核酸烷基化（不加中断剂） 2、烷化剂 乙酰基乙烯亚胺（AEI） 二乙烯亚胺(BEI) 缩水甘油醛 （使微生物核酸烷基化,灭活后加2%硫代 硫酸钠中断灭活） 3、苯酚（石炭酸）：用于防腐， 很少用于疫苗研制 4、结晶紫：蛋白质变性。（溶于有机溶剂） 用于诊断抗原的制备：鸡白痢抗原 5、β-丙酰内酯 病毒灭活剂，为狂犬病灭活苗制备所用. 注意：灭活剂对人有害， 有时对皮肤粘膜有强烈刺 激性如：甲醛、β-丙酰内酯;甲醛溶液： 《规程》（2000）中的26种灭活疫苗 灭活机理： 灭活浓度：多数为0.1％～0.3％ 灭活原则：低浓度、短时间而又能达到彻底灭活目的； 必要时可在灭活后加入硫代硫酸钠，以中断其反应。 ;烷化剂（alkylating agent） 乙酰基乙烯亚胺（AEI)、二乙烯亚胺(BEI) 、缩水甘油醛 灭活机制： 1. 烷化DNA分子中的鸟嘌呤或腺嘌呤等，引起单链断裂或双螺旋链交联，因改变DNA的结构而破坏其功能，妨碍RNA的合成，从而抑制细胞的有丝分裂。 2. 与酶系统和核蛋白起作用而干扰核酸代谢。 优点：能破坏病毒的核酸芯髓，使病毒完全丧失感染力，而 不损害其蛋白衣壳，保留其保护性抗原。 ;1、乙酰基乙烯亚胺（N-acetyl ethylenimine，AEI） 淡黄色澄明液体，有轻微氨臭味，能与水或醇任意混合。 0～4℃可保存1年，在-20℃??保存2年 AEI功能基团是乙烯亚胺基，可用于口蹄疫灭活苗。 口蹄疫病毒液: 终浓度0.05％，30℃8h, 加2％硫代硫酸钠阻断 2、二乙烯亚胺（binary ethylenimine，BEI） 市购商品为0.2％的BEI溶液，在0～4℃可保存1个月; 终浓度0.02%, 加入2％硫代硫酸钠中断灭活。 ;3、缩水甘油醛（glycidaldchyde，GDA） 大肠杆菌、噬菌体、新城疫病毒灭活效果优于甲醛。 本品易挥发，水溶液含量为15～31mg/ml。 0～4℃ 3个月含量渐下降，约半年失效；20℃只能保存10d。 4、?-丙酰内酯（?－propiolactone）又名羟基丙酸-?-内酯 无色有刺激气味的液体，水溶液应密封于玻璃瓶中5℃保存 水中溶解度37％，能与丙酮、醚和氯仿任意混合 对皮肤、粘膜及眼有强刺激性，对动物有致癌性。 病毒灭活后，能保持良好的免疫原性 主要用于狂犬病灭活疫苗的制备。 ;三、影响灭活作用的因素 1、灭活剂特异性：石炭酸对真菌和病毒效果差，甲醛最常用。 2、微生物种类和特性 3、灭活剂浓度（一定要适合） 4、灭活温度（具体不同病原体或毒素，其灭活时间和温度不一致） 5、灭活时间 6、灭活PH值 7、有机物存在; 第二节 保护剂（稳定剂） 保护剂：又称稳定剂（stabilizer） ，是指一类能防止生物活性物质在冷冻真空干燥时受到破坏的物质。（指对疫苗生产、血清制备等） 保护剂用途（不同用途加不同保护剂, 主要针对活的微生物或细胞） ① 菌种或毒种保存：常用甘油作保护剂 ② 细胞株保存：常用二甲基亚砜(DMSO) DMSO:二甲基亚砜，一种细胞的保护剂 ③ 疫苗冷冻真空干燥制备时：加脱脂乳（或二甲基亚 砜）和蔗糖等（不同国家有不同配方） ④ 干扰素类生物活性物质的保存：加葡聚糖 ; 保护剂（protector）的分类; ?复合物 脱脂乳、明胶、蛋白质、蛋白胨、糊精