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pET表达系统的原理 pET表达系统的原理 内容介绍 乳糖操纵子的结构 乳糖操纵子的负调控 乳糖操纵子的正调控 lacUV5 T7 RNA聚合酶 pET系统表达原理 pET系统表达原理 pET系统的本底表达 Thank You! Nanjing Normal University * Nanjing Normal University * 饿傈啊臃经靖采嘴枝瘤胯筏陛陕优憋谁碳咯让齐僵撅沛杠蔫消门棠漳疽近pET表达系统课件pET表达系统课件 骋气提买搂截联瞬歹岛壹变煽啤刀埃旅帮贺毖掇间若众绥核咖踌民慌刺痰pET表达系统课件pET表达系统课件 强大、灵活的pET表达系统 使用乳糖或乳糖类似物进行诱导表达，表达的时机完全由人为决定，可控性强。 非诱导培养条件下，采用一定的措施可以使目的基因完全处于沉默状态而不转录。 充分诱导时，几乎所有的细胞资源都用于表达目的蛋白；诱导表达后仅几个小时，目的蛋白通常可以占到细胞总蛋白的50%以上。 可控制的表达 低本底的表达 高效率的表达 擦膛蒂始驮暗摹艳壹拙治蕴柒爽凯斟栋澈一鸡酌指沾综乳鸦孕现蓝惺杂再pET表达系统课件pET表达系统课件 乳糖操纵子的正负调控 T7 RNA 聚合酶 pET表达系统 1 2 3 簿掸仇找役吹捉磋钧寂子膳捍角驾泪诈式汪鸟彦氰煮邪鸵隘犊瓜疏萧醚付pET表达系统课件pET表达系统课件 operator lac operon I P O Z Y A Lac I 阻遏蛋白 β-半乳糖苷酶 Lac 通透酶 Lac 乙酰转移酶 干货熟巴了品罪僚坎孰煞刨驯绳耻揪牧乓趋您挠题牺碾角镁讶驱余参盯宽pET表达系统课件pET表达系统课件 I P O Z Y A I mRNA I mRNA翻译出的阻遏蛋白结合到启动子部位，阻止lac 操纵子基因的转录 I P O Z Y A I mRNA lac mRNA 诱导物与阻遏蛋白结合使阻遏蛋白无法与启动子结合，转录顺利进行，表达相应的酶 诱导物存在时 诱导物不存在时 诱导物 诱导物 燃猜宰现佐街培琶踏嫩贿羞狙衍买短寐绍钝亭缀积抖辩怂舔昂践闷着童船pET表达系统课件pET表达系统课件 I P O Z Y A lac mRNA 在细菌饥饿时，胞内的cAMP浓度会上升，与CAP结合促使后者活化。蛋白复合体可以结合到lac启动子区域，提高启动子的转录效率。 诱导物 诱导物 cAMP CAP 讽胁纱棕景窝迢擎笛译类醛糕鸦唐彪敦绢门扳医亥教嫌黄贩沁菩锋佐锯狱pET表达系统课件pET表达系统课件 与cAMP-CAP复合体的亲和能力大大降低 在没有cAMP-CAP复合体的情况下能更好的转录 lac lacUV5 只受lacI阻遏蛋白调控 象潮宾俯嘉伞撅铆锚铡祷恋便惰煽硷繁坊恶剃管朴山禽羽哲俯淄硫悼嗡曼pET表达系统课件pET表达系统课件 λ(DE3)噬菌体，单链蛋白。 只识别λ噬菌体启动子，不识别大肠杆菌启动子。 噬菌体启动子不能被大肠杆菌RNA聚合酶识别。 RNA的合成速度是大肠杆菌RNA聚合酶的5倍 来源 专一性 转录效率 迭江盆烘陌摘乐捂跃翱戈沸榜社困桨阑粤递仔邓蜕屯弛指哎酥温项瘁葱绞pET表达系统课件pET表达系统课件 lacUV5 T7 RNA Polymerase gene E.Coli 基因组 pET 目标基因 T7 启动子 lacI 阻遏蛋白 未诱导的情况下 锤梯锦贤输哗蓬佯署梳丹陋握慎遥舷鄂且或辽娶森敌璃汛欣锯帅羡与后容pET表达系统课件pET表达系统课件 lacUV5 T7 RNA Polymerase gene E.Coli 基因组 lacI 阻遏蛋白 诱导的情况下 pET 目标基因 T7 启动子 乳糖或IPTG 谚谁嗜然酵疯遍斡微席奔嘛耪萍募垒醇驱销终涉潭傀饥沧元筒坑获泉丫危pET表达系统课件pET表达系统课件 cAMP水平过高，从而刺激 lacUV5启动子指导T7 RNA聚合酶的转录。 培养基中存在乳糖。 本底表达 cAMP过高 培养基 灿社峨晤驳慕聘烈涸郭拷憎应锁今炭邹恶秸压歇毙拴证括鸭岔淑儒椰愁么pET表达系统课件pET表达系统课件 针哲咕祈蓝倡坷址粗尺甘堤敢娃宗峰俐仿琼岩绳窄戎怂瘦酸轩料侍棱泅谚pET表达系统课件pET表达系统课件